CAJ | 학술논문

去整合素和金属蛋白酶10(ADAM10),是一种能够水解30余种跨膜蛋白质的"脱落酶"(sheddase),参与诸多生理过程和致病机制,如胚胎发育、细胞粘附、信号转导、免疫反应、癌症和阿尔茨海默病.迄今,已报道的ADAM10完全基因敲除小鼠和大脑神经前体细胞特异性ADAM10基因敲除小鼠分别于胚胎期或围产期死亡,致使无法研究成年小鼠大脑神经细胞ADAM10基因的功能.文章利用本研究小组建立的CaMKIIα-Cre转基因小鼠与ADAM10loxP/loxP转基因小鼠杂交,获得了CaMKllα-Cre/ADAM10loxP/loxP小鼠,并对其进行鉴定.利用PCR方法检测成年ADAM10 cKO小鼠大脑基因组DNA表明,ADAM10基因缺失主要发生在前脑皮层和海马中.荧光定量PCR检测结果显示,ADAM10 mRNA的表达水平在前脑皮层和海马中分别降低55.7%和60.8%;使用Western blotting方法研究发现,ADAM10成熟蛋白质的含量在前脑皮层和海马中分别减少63%和84.8%.采用免疫组织化学方法检测表明,成年ADAM10 cKO小鼠与野生型小鼠相比,其大脑皮层和海马神经细胞的ADAM10免疫染色明显减弱,而其它细胞如胶质细胞的免疫染色基本一致.总之,文章成功制备了首个存活至成年的大脑神经细胞特异性ADAM10基因敲除(cKO)小鼠,克服了小鼠因ADAM10缺失在胚胎期或围产期死亡的弊端,为研究成年小鼠大脑神经细胞ADAM10基因的功能奠定了坚实的基础.
거정합소화금속단백매10(ADAM10),시일충능구수해30여충과막단백질적"탈락매"(sheddase),삼여제다생리과정화치병궤제,여배태발육、세포점부、신호전도、면역반응、암증화아이자해묵병.흘금,이보도적ADAM10완전기인고제소서화대뇌신경전체세포특이성ADAM10기인고제소서분별우배태기혹위산기사망,치사무법연구성년소서대뇌신경세포ADAM10기인적공능.문장이용본연구소조건립적CaMKIIα-Cre전기인소서여ADAM10loxP/loxP전기인소서잡교,획득료CaMKllα-Cre/ADAM10loxP/loxP소서,병대기진행감정.이용PCR방법검측성년ADAM10 cKO소서대뇌기인조DNA표명,ADAM10기인결실주요발생재전뇌피층화해마중.형광정량PCR검측결과현시,ADAM10 mRNA적표체수평재전뇌피층화해마중분별강저55.7%화60.8%;사용Western blotting방법연구발현,ADAM10성숙단백질적함량재전뇌피층화해마중분별감소63%화84.8%.채용면역조직화학방법검측표명,성년ADAM10 cKO소서여야생형소서상비,기대뇌피층화해마신경세포적ADAM10면역염색명현감약,이기타세포여효질세포적면역염색기본일치.총지,문장성공제비료수개존활지성년적대뇌신경세포특이성ADAM10기인고제(cKO)소서,극복료소서인ADAM10결실재배태기혹위산기사망적폐단,위연구성년소서대뇌신경세포ADAM10기인적공능전정료견실적기출.