中华妇幼临床医学杂志（电子版）
中華婦幼臨床醫學雜誌（電子版）
중화부유림상의학잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF OBSTETRICS & GYNECOLOGY AND PEDIATRICS(ELECTRONIC VERSION)
2013年
4期
372-377
,共6页
胡雯辉%于力%温跃强%张瑶%郝志宏%陈蓉燕
鬍雯輝%于力%溫躍彊%張瑤%郝誌宏%陳蓉燕
호문휘%우력%온약강%장요%학지굉%진용연
系膜细胞%转化生长因子-β1%Smad2%Ⅳ型胶原%来氟米特
繫膜細胞%轉化生長因子-β1%Smad2%Ⅳ型膠原%來氟米特
계막세포%전화생장인자-β1%Smad2%Ⅳ형효원%래불미특
glommerular mesangial cell%transforming growth factor-β1%Smad2%collagen Ⅳ%leflunomide
目的 探讨转化生长因子(TGF)-β1诱导肾小球系膜细胞(GMC)中Smad2的表达与Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的相关性及来氟米特(LEF)的干预作用.方法 建立体外培养大鼠GMC模型,经鉴定后第7代用于实验.按照对大鼠GMC模型处理方式将其分为:TGF-β1组(培养液+TGF-β1 5 ng/mL),LEF-1组(培养液+LEF 5 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL),LEF-2组(培养液+LEF 50 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL)与对照组(仅加入培养液).分别于15 min,30 min,1h,2h和6h收集标本,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定细胞培养上清液ColⅣ表达.采用间接免疫荧光法检测各组磷酸化(P)-Smad2蛋白表达；采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2 mRNA表达.结果 在各时点,①ColⅣ表达量比较:TGF-β1组显著高于对照组(P＜0.05),LEF-1与LEF-2组均显著低于TGF-β1组(P＜0.05).②P-Smad2表达量比较:在对照组仅少量表达,TGF-β1组表达明显升高,与对照组比较,差异有显著意义(P＜0.05); LEF-1与LEF-2组的P-Smad2表达较TGF-β1组显著下降,差异有显著意义(P＜0.05).③Smad2 mRNA表达量比较:在TGF-β1组表达显著高于对照组(P＜0.05),而在LEF-1组与LEF-2组显著低于TGF-β1组(P＜0.01)；但LEF-1组与LEF-2组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).④GMC上清液中,ColⅣ与Smad2 mRNA表达量呈正相关(r=0.707,P＜0.05).结论 经TGF-β1刺激后,体外培养大鼠GMC中P-Smad2表达及ColⅣ表达量均增加,因此LEF可降低Smad2表达与ColⅣ表达水平,减轻细胞外基质(ECM)沉积.本研究结果为LEF的肾保护作用提供了实验依据.
目的 探討轉化生長因子(TGF)-β1誘導腎小毬繫膜細胞(GMC)中Smad2的錶達與Ⅳ型膠原(ColⅣ)錶達的相關性及來氟米特(LEF)的榦預作用.方法 建立體外培養大鼠GMC模型,經鑒定後第7代用于實驗.按照對大鼠GMC模型處理方式將其分為:TGF-β1組(培養液+TGF-β1 5 ng/mL),LEF-1組(培養液+LEF 5 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL),LEF-2組(培養液+LEF 50 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL)與對照組(僅加入培養液).分彆于15 min,30 min,1h,2h和6h收集標本,採用酶聯免疫吸附測定(ELISA)法測定細胞培養上清液ColⅣ錶達.採用間接免疫熒光法檢測各組燐痠化(P)-Smad2蛋白錶達；採用熒光半定量RT-PCR法檢測各組Smad2 mRNA錶達.結果 在各時點,①ColⅣ錶達量比較:TGF-β1組顯著高于對照組(P＜0.05),LEF-1與LEF-2組均顯著低于TGF-β1組(P＜0.05).②P-Smad2錶達量比較:在對照組僅少量錶達,TGF-β1組錶達明顯升高,與對照組比較,差異有顯著意義(P＜0.05); LEF-1與LEF-2組的P-Smad2錶達較TGF-β1組顯著下降,差異有顯著意義(P＜0.05).③Smad2 mRNA錶達量比較:在TGF-β1組錶達顯著高于對照組(P＜0.05),而在LEF-1組與LEF-2組顯著低于TGF-β1組(P＜0.01)；但LEF-1組與LEF-2組比較,差異無統計學意義(P＞0.05).④GMC上清液中,ColⅣ與Smad2 mRNA錶達量呈正相關(r=0.707,P＜0.05).結論 經TGF-β1刺激後,體外培養大鼠GMC中P-Smad2錶達及ColⅣ錶達量均增加,因此LEF可降低Smad2錶達與ColⅣ錶達水平,減輕細胞外基質(ECM)沉積.本研究結果為LEF的腎保護作用提供瞭實驗依據.
목적 탐토전화생장인자(TGF)-β1유도신소구계막세포(GMC)중Smad2적표체여Ⅳ형효원(ColⅣ)표체적상관성급래불미특(LEF)적간예작용.방법 건입체외배양대서GMC모형,경감정후제7대용우실험.안조대대서GMC모형처리방식장기분위:TGF-β1조(배양액+TGF-β1 5 ng/mL),LEF-1조(배양액+LEF 5 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL),LEF-2조(배양액+LEF 50 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL)여대조조(부가입배양액).분별우15 min,30 min,1h,2h화6h수집표본,채용매련면역흡부측정(ELISA)법측정세포배양상청액ColⅣ표체.채용간접면역형광법검측각조린산화(P)-Smad2단백표체；채용형광반정량RT-PCR법검측각조Smad2 mRNA표체.결과 재각시점,①ColⅣ표체량비교:TGF-β1조현저고우대조조(P＜0.05),LEF-1여LEF-2조균현저저우TGF-β1조(P＜0.05).②P-Smad2표체량비교:재대조조부소량표체,TGF-β1조표체명현승고,여대조조비교,차이유현저의의(P＜0.05); LEF-1여LEF-2조적P-Smad2표체교TGF-β1조현저하강,차이유현저의의(P＜0.05).③Smad2 mRNA표체량비교:재TGF-β1조표체현저고우대조조(P＜0.05),이재LEF-1조여LEF-2조현저저우TGF-β1조(P＜0.01)；단LEF-1조여LEF-2조비교,차이무통계학의의(P＞0.05).④GMC상청액중,ColⅣ여Smad2 mRNA표체량정정상관(r=0.707,P＜0.05).결론 경TGF-β1자격후,체외배양대서GMC중P-Smad2표체급ColⅣ표체량균증가,인차LEF가강저Smad2표체여ColⅣ표체수평,감경세포외기질(ECM)침적.본연구결과위LEF적신보호작용제공료실험의거.
