科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2013年
22期
6389-6393
,共5页
巩伟丽%涂海清%韩秋影%张飒%李腾
鞏偉麗%塗海清%韓鞦影%張颯%李騰
공위려%도해청%한추영%장삽%리등
UBXN1%慢病毒%稳定干涉
UBXN1%慢病毒%穩定榦涉
UBXN1%만병독%은정간섭
UBXN1%lentivirus%stable interference
构建并鉴定UBXN1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统建立稳定干涉细胞系并进一步研究UBXN1的功能.将携带不同特异性干涉序列的DNA片段插入PLKO.1载体中构建慢病毒表达载体,并制备慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染U2OS细胞,建立稳定干涉细胞系,应用real-time PCR和western blot技术分别检测U2OS细胞中UBXN1 mRNA和蛋白质水平的表达差异.重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,western blot检测证实设计的五条shRNA干扰序列有效的敲低U2OS细胞中内源性UBXN1的表达.成功制备UBXN1的慢病毒干涉颗粒,并建立UBXN1稳定下调的U2OS细胞系.
構建併鑒定UBXN1-shRNA慢病毒錶達載體,以便應用RNAi技術以及慢病毒感染繫統建立穩定榦涉細胞繫併進一步研究UBXN1的功能.將攜帶不同特異性榦涉序列的DNA片段插入PLKO.1載體中構建慢病毒錶達載體,併製備慢病毒顆粒.將慢病毒顆粒感染U2OS細胞,建立穩定榦涉細胞繫,應用real-time PCR和western blot技術分彆檢測U2OS細胞中UBXN1 mRNA和蛋白質水平的錶達差異.重組剋隆經酶切證實shRNA正確插入慢病毒載體,DNA測序證實插入的序列正確,western blot檢測證實設計的五條shRNA榦擾序列有效的敲低U2OS細胞中內源性UBXN1的錶達.成功製備UBXN1的慢病毒榦涉顆粒,併建立UBXN1穩定下調的U2OS細胞繫.
구건병감정UBXN1-shRNA만병독표체재체,이편응용RNAi기술이급만병독감염계통건립은정간섭세포계병진일보연구UBXN1적공능.장휴대불동특이성간섭서렬적DNA편단삽입PLKO.1재체중구건만병독표체재체,병제비만병독과립.장만병독과립감염U2OS세포,건립은정간섭세포계,응용real-time PCR화western blot기술분별검측U2OS세포중UBXN1 mRNA화단백질수평적표체차이.중조극륭경매절증실shRNA정학삽입만병독재체,DNA측서증실삽입적서렬정학,western blot검측증실설계적오조shRNA간우서렬유효적고저U2OS세포중내원성UBXN1적표체.성공제비UBXN1적만병독간섭과립,병건립UBXN1은정하조적U2OS세포계.
