科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2013年
22期
6385-6388
,共4页
巩伟丽%徐广%韩秋影%陈媛
鞏偉麗%徐廣%韓鞦影%陳媛
공위려%서엄%한추영%진원
PDRG1%慢病毒感染%抗生素筛选%稳定敲低细胞系
PDRG1%慢病毒感染%抗生素篩選%穩定敲低細胞繫
PDRG1%만병독감염%항생소사선%은정고저세포계
PDRG1%lentivirus infection%antibiotic screening%knock down-stable cell line
PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因.已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路；同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控.但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报道,为了深入研究PDRG1对NF-κB信号通路的调控机理,构建了稳定干涉PDRG1的HeLa细胞系.选择了基于慢病毒载体pLKO.1的感染体系,该慢病毒体系可以同时感染分裂期与非分裂期的细胞,将目的基因干涉序列稳定整合至靶细胞基因组中；再经过抗生素压力筛选后在短时间内获得稳定干涉目的基因表达的细胞株.设计合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1载体,转染病毒包装细胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa细胞系,进一步经过嘌呤霉素压力筛选成功获得稳定表达PDRG1干涉序列的细胞株.该稳定细胞株的建立为PDRG1的功能研究提供了必要的实验工具.
PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是實驗室通過文庫篩選髮現的參與NF-kB信號通路調控的一箇新基因.已知PDRG1在多種腫瘤中高錶達,併參與p53信號通路；同時該基因受UV以及基因毒性等刺激調控.但其在NF-κB信號通路中作用尚未見報道,為瞭深入研究PDRG1對NF-κB信號通路的調控機理,構建瞭穩定榦涉PDRG1的HeLa細胞繫.選擇瞭基于慢病毒載體pLKO.1的感染體繫,該慢病毒體繫可以同時感染分裂期與非分裂期的細胞,將目的基因榦涉序列穩定整閤至靶細胞基因組中；再經過抗生素壓力篩選後在短時間內穫得穩定榦涉目的基因錶達的細胞株.設計閤成PDRG1榦涉序列併剋隆至pLKO.1載體,轉染病毒包裝細胞293TN後收集慢病毒上清感染HeLa細胞繫,進一步經過嘌呤黴素壓力篩選成功穫得穩定錶達PDRG1榦涉序列的細胞株.該穩定細胞株的建立為PDRG1的功能研究提供瞭必要的實驗工具.
PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)시실험실통과문고사선발현적삼여NF-kB신호통로조공적일개신기인.이지PDRG1재다충종류중고표체,병삼여p53신호통로；동시해기인수UV이급기인독성등자격조공.단기재NF-κB신호통로중작용상미견보도,위료심입연구PDRG1대NF-κB신호통로적조공궤리,구건료은정간섭PDRG1적HeLa세포계.선택료기우만병독재체pLKO.1적감염체계,해만병독체계가이동시감염분렬기여비분렬기적세포,장목적기인간섭서렬은정정합지파세포기인조중；재경과항생소압력사선후재단시간내획득은정간섭목적기인표체적세포주.설계합성PDRG1간섭서렬병극륭지pLKO.1재체,전염병독포장세포293TN후수집만병독상청감염HeLa세포계,진일보경과표령매소압력사선성공획득은정표체PDRG1간섭서렬적세포주.해은정세포주적건립위PDRG1적공능연구제공료필요적실험공구.
