消化肿瘤杂志（电子版）
消化腫瘤雜誌（電子版）
소화종류잡지（전자판）
JOURNAL OF DIGESTIVE ONCOLOGY(ELECTRONIC VERSION)
2012年
3期
163-169
,共7页
黎伯培%陈俊强%刘金禄%王震%毛远天%陈业阳%裴明毓%徐瑜杰
黎伯培%陳俊彊%劉金祿%王震%毛遠天%陳業暘%裴明毓%徐瑜傑
려백배%진준강%류금록%왕진%모원천%진업양%배명육%서유걸
多药耐药%氟尿嘧啶%胃癌%凋亡
多藥耐藥%氟尿嘧啶%胃癌%凋亡
다약내약%불뇨밀정%위암%조망
目的构建耐5-FU的胃癌耐药细胞株,初步探讨细胞发生5-FU耐药的可能机制.方法 通过药物耐药间歇冲击并浓度梯度递增法诱导建立胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU.应用MTT法检测亲代细胞对4种化疗药物的IC50并计算耐药指数(RI).通过MTT法绘制细胞的生长曲线计算细胞倍增时间.流式细胞仪分析细胞周期分布.RT-PCR检测抑癌基因P53、癌基因Bcl-2、促凋亡基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)家族成员(DAPK-1、DAPK-2、DAPK-3)、多药耐药蛋白(multidrug resistance proteins,MRP)亚家族中的MRP-6、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)、切除交叉互补修复基因(excision repair cross-complementing 1,ERCC-1)的表达.Western Blot检测MDR1 编码的P糖蛋白(P-gp)的表达水平.结果SGC-7901/5-FU对5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数分别为6.26、3.71、5.25.SGC-7901与SGC-7901/5-FU细胞倍增时间分别为(30.82±1.46)h和(46.01±4.15)h,SGC-7901/5-FU细胞增殖速率显著变缓(P＜0.05).与亲代细胞比较,耐药子株S期细胞显著减少,G0/G1期细胞则显著增高(P＜0.01),而G2/M期细胞无显著差异(P＞0.05).耐药子株SGC-7901/5-FU细胞MDR-1、MRP-6、DAPK-3和P-gp表达显著上调(P＜0.01),而ERCC-1、caspase-3、P53、DAPK-1、DAPK-2、Bcl-2的表达均无显著变化(P＞0.05). 结论成功构建胃癌耐5-FU细胞株SGC-7901/5-FU,其对顺铂、环磷酰胺具有交叉耐药,耐药机制与细胞周期S期细胞比例减少、G0/G1期细胞比例升高有关,可能与MDR-1、MRP-6、DAPK-3基因及P-gp蛋白表达上调有关.
目的構建耐5-FU的胃癌耐藥細胞株,初步探討細胞髮生5-FU耐藥的可能機製.方法 通過藥物耐藥間歇遲擊併濃度梯度遞增法誘導建立胃癌耐藥細胞株SGC-7901/5-FU.應用MTT法檢測親代細胞對4種化療藥物的IC50併計算耐藥指數(RI).通過MTT法繪製細胞的生長麯線計算細胞倍增時間.流式細胞儀分析細胞週期分佈.RT-PCR檢測抑癌基因P53、癌基因Bcl-2、促凋亡基因半胱氨酰天鼕氨痠特異性蛋白酶-3(caspase-3)、死亡相關蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)傢族成員(DAPK-1、DAPK-2、DAPK-3)、多藥耐藥蛋白(multidrug resistance proteins,MRP)亞傢族中的MRP-6、多藥耐藥基因1(multidrug resistance 1,MDR1)、切除交扠互補脩複基因(excision repair cross-complementing 1,ERCC-1)的錶達.Western Blot檢測MDR1 編碼的P糖蛋白(P-gp)的錶達水平.結果SGC-7901/5-FU對5-FU、順鉑、環燐酰胺的耐藥指數分彆為6.26、3.71、5.25.SGC-7901與SGC-7901/5-FU細胞倍增時間分彆為(30.82±1.46)h和(46.01±4.15)h,SGC-7901/5-FU細胞增殖速率顯著變緩(P＜0.05).與親代細胞比較,耐藥子株S期細胞顯著減少,G0/G1期細胞則顯著增高(P＜0.01),而G2/M期細胞無顯著差異(P＞0.05).耐藥子株SGC-7901/5-FU細胞MDR-1、MRP-6、DAPK-3和P-gp錶達顯著上調(P＜0.01),而ERCC-1、caspase-3、P53、DAPK-1、DAPK-2、Bcl-2的錶達均無顯著變化(P＞0.05). 結論成功構建胃癌耐5-FU細胞株SGC-7901/5-FU,其對順鉑、環燐酰胺具有交扠耐藥,耐藥機製與細胞週期S期細胞比例減少、G0/G1期細胞比例升高有關,可能與MDR-1、MRP-6、DAPK-3基因及P-gp蛋白錶達上調有關.
목적구건내5-FU적위암내약세포주,초보탐토세포발생5-FU내약적가능궤제.방법 통과약물내약간헐충격병농도제도체증법유도건립위암내약세포주SGC-7901/5-FU.응용MTT법검측친대세포대4충화료약물적IC50병계산내약지수(RI).통과MTT법회제세포적생장곡선계산세포배증시간.류식세포의분석세포주기분포.RT-PCR검측억암기인P53、암기인Bcl-2、촉조망기인반광안선천동안산특이성단백매-3(caspase-3)、사망상관단백격매(death associated protein kinase,DAPK)가족성원(DAPK-1、DAPK-2、DAPK-3)、다약내약단백(multidrug resistance proteins,MRP)아가족중적MRP-6、다약내약기인1(multidrug resistance 1,MDR1)、절제교차호보수복기인(excision repair cross-complementing 1,ERCC-1)적표체.Western Blot검측MDR1 편마적P당단백(P-gp)적표체수평.결과SGC-7901/5-FU대5-FU、순박、배린선알적내약지수분별위6.26、3.71、5.25.SGC-7901여SGC-7901/5-FU세포배증시간분별위(30.82±1.46)h화(46.01±4.15)h,SGC-7901/5-FU세포증식속솔현저변완(P＜0.05).여친대세포비교,내약자주S기세포현저감소,G0/G1기세포칙현저증고(P＜0.01),이G2/M기세포무현저차이(P＞0.05).내약자주SGC-7901/5-FU세포MDR-1、MRP-6、DAPK-3화P-gp표체현저상조(P＜0.01),이ERCC-1、caspase-3、P53、DAPK-1、DAPK-2、Bcl-2적표체균무현저변화(P＞0.05). 결론성공구건위암내5-FU세포주SGC-7901/5-FU,기대순박、배린선알구유교차내약,내약궤제여세포주기S기세포비례감소、G0/G1기세포비례승고유관,가능여MDR-1、MRP-6、DAPK-3기인급P-gp단백표체상조유관.
