CAJ | 학술논문

目的:探讨Sprague -Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的动员、分离培养及鉴定方法,分析其表面标记和多向分化潜能,为运动创伤中的细胞治疗和组织工程产品培育提供新来源的、可以微创获得和自体细胞移植的种子细胞.方法:联合动员大鼠外周血MSC,采集腹主动脉外周血4ml,使用淋巴细胞分离液结合密度梯度离心方法分离外周血单核细胞,体外培养至第3代,于显微镜下观察其形态和生长状态.取第3代MSC,鉴定其表型并向成骨、成脂和成软骨诱导分化,以证明其干细胞的特性.结果:经淋巴分离液结合密度梯度离心方法分离培养的外周血单核细胞,3～5天可见少量长梭形细胞贴壁,7～9天见细胞成簇生长,并形成克隆集落.第3代细胞形态较均一,生长增殖良好；表达典型的MSC标记CD44和CD90,不表达造血干细胞标记CD34和CD45.成骨诱导21天后,茜素红和ALP染色阳性,有矿化结节形成.成脂诱导21天后,油红O染色阳性,细胞内有脂滴形成.细胞微团无血清成软骨诱导21天后,甲苯胺蓝染色阳性,细胞外有蛋白多糖分泌;免疫组织化学染色示,特异性软骨基质Ⅱ型胶原表达阳性.结论:采用联合药物动员方法能促进干细胞向外周血释放,分离培养的外周血干细胞经鉴定为MSC,体外具备三系分化潜能,有望成为运动创伤中新的细胞治疗和组织工程产品培育的种子细胞来源.
목적:탐토Sprague -Dawley대서외주혈래원간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSC)적동원、분리배양급감정방법,분석기표면표기화다향분화잠능,위운동창상중적세포치료화조직공정산품배육제공신래원적、가이미창획득화자체세포이식적충자세포.방법:연합동원대서외주혈MSC,채집복주동맥외주혈4ml,사용림파세포분리액결합밀도제도리심방법분리외주혈단핵세포,체외배양지제3대,우현미경하관찰기형태화생장상태.취제3대MSC,감정기표형병향성골、성지화성연골유도분화,이증명기간세포적특성.결과:경림파분리액결합밀도제도리심방법분리배양적외주혈단핵세포,3～5천가견소량장사형세포첩벽,7～9천견세포성족생장,병형성극륭집락.제3대세포형태교균일,생장증식량호；표체전형적MSC표기CD44화CD90,불표체조혈간세포표기CD34화CD45.성골유도21천후,천소홍화ALP염색양성,유광화결절형성.성지유도21천후,유홍O염색양성,세포내유지적형성.세포미단무혈청성연골유도21천후,갑분알람염색양성,세포외유단백다당분비;면역조직화학염색시,특이성연골기질Ⅱ형효원표체양성.결론:채용연합약물동원방법능촉진간세포향외주혈석방,분리배양적외주혈간세포경감정위MSC,체외구비삼계분화잠능,유망성위운동창상중신적세포치료화조직공정산품배육적충자세포래원.