畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
7期
61-64
,共4页
三重RT-PCR%牛病毒性腹泻病毒%牛冠状病毒%牛轮状病毒
三重RT-PCR%牛病毒性腹瀉病毒%牛冠狀病毒%牛輪狀病毒
삼중RT-PCR%우병독성복사병독%우관상병독%우륜상병독
根椐GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)和牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)3种病毒基因序列,设计引物.在建立各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化三重RT-PCR反应条件,建立了3种病毒的三重RT-PCR技术,用这3对引物对同一样品中的BVDV、BCV、BRV核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果可同时扩增BVDV的466 bp,BCV的685 bp,BRV的247 bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型扩增结果均为阴性.敏感性测定表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BRV和10 pg的BCV模板.用45份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,显示两者的总符合率为100％.表明建立的多重RT-PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断.
根椐GenBank中已髮錶的牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠狀病毒(bovine coronavirus,BCV)和牛輪狀病毒(bovine rotavirus,BRV)3種病毒基因序列,設計引物.在建立各病毒單項RT-PCR技術的基礎上,優化三重RT-PCR反應條件,建立瞭3種病毒的三重RT-PCR技術,用這3對引物對同一樣品中的BVDV、BCV、BRV覈痠模闆進行三重RT-PCR擴增,結果可同時擴增BVDV的466 bp,BCV的685 bp,BRV的247 bp的特異性片段,而對豬瘟病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛呼吸道閤胞體病毒和牛副流感病毒3型擴增結果均為陰性.敏感性測定錶明,該三重RT-PCR技術能檢齣10 pg的BVDV、1 pg的BRV和10 pg的BCV模闆.用45份臨床病料對本研究多重RT-PCR技術和單項RT-PCR技術進行對比驗證,顯示兩者的總符閤率為100％.錶明建立的多重RT-PCR檢測方法具有特異、快速、準確的特點,可用于對這3種病毒的同時檢測和鑒彆診斷.
근거GenBank중이발표적우병독성복사병독(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、우관상병독(bovine coronavirus,BCV)화우륜상병독(bovine rotavirus,BRV)3충병독기인서렬,설계인물.재건립각병독단항RT-PCR기술적기출상,우화삼중RT-PCR반응조건,건립료3충병독적삼중RT-PCR기술,용저3대인물대동일양품중적BVDV、BCV、BRV핵산모판진행삼중RT-PCR확증,결과가동시확증BVDV적466 bp,BCV적685 bp,BRV적247 bp적특이성편단,이대저온병독、우전염성비기관염병독、우호흡도합포체병독화우부류감병독3형확증결과균위음성.민감성측정표명,해삼중RT-PCR기술능검출10 pg적BVDV、1 pg적BRV화10 pg적BCV모판.용45빈림상병료대본연구다중RT-PCR기술화단항RT-PCR기술진행대비험증,현시량자적총부합솔위100％.표명건립적다중RT-PCR검측방법구유특이、쾌속、준학적특점,가용우대저3충병독적동시검측화감별진단.
