中国现代普通外科进展
中國現代普通外科進展
중국현대보통외과진전
CHINESE JOURNAL OF CURRENT ADVANCES IN GENERAL SURGERY
2014年
4期
263-265,289
,共4页
张少波%何谦%郑晓宏%张诚华
張少波%何謙%鄭曉宏%張誠華
장소파%하겸%정효굉%장성화
白介素-8%RNA干扰%慢病毒%乳腺肿瘤%基因沉默
白介素-8%RNA榦擾%慢病毒%乳腺腫瘤%基因沉默
백개소-8%RNA간우%만병독%유선종류%기인침묵
Interleukin-8%R NA interference%Lentiviral%Breast neoplasms%Gene silencing
目的:构建携载人白介素-8(IL-8)shRNA的慢病毒并鉴定其对MDA-MB-231细胞该基因的沉默效率.方法:设计两个IL-8基因特异性siRNA靶点,与pMagic7.1慢病毒载体质粒重组,经PCR鉴定并测序,通过293T细胞实现慢病毒包装,DNA定量试剂盒分别检测两种慢病毒滴度.将这两种慢病毒分别以最佳感染复数感染MDA-MB-231细胞,通过Real-time PCR检测IL-8沉默效率.结果:PCR鉴定阳性的shRNA重组质粒测序正确,包装后两种病毒滴度分别为1.93×109 IU/mL和1.89×109 IU/mL;分别以MOI=40感染MDA-MB-231细胞后,IL-8沉默效率分别为80％和90％.结论:成功构建IL-8 shRNA慢病毒并达到较高的沉默效率,为下一步研究沉默靶基因后细胞生物学功能变化提供实验基础.
目的:構建攜載人白介素-8(IL-8)shRNA的慢病毒併鑒定其對MDA-MB-231細胞該基因的沉默效率.方法:設計兩箇IL-8基因特異性siRNA靶點,與pMagic7.1慢病毒載體質粒重組,經PCR鑒定併測序,通過293T細胞實現慢病毒包裝,DNA定量試劑盒分彆檢測兩種慢病毒滴度.將這兩種慢病毒分彆以最佳感染複數感染MDA-MB-231細胞,通過Real-time PCR檢測IL-8沉默效率.結果:PCR鑒定暘性的shRNA重組質粒測序正確,包裝後兩種病毒滴度分彆為1.93×109 IU/mL和1.89×109 IU/mL;分彆以MOI=40感染MDA-MB-231細胞後,IL-8沉默效率分彆為80％和90％.結論:成功構建IL-8 shRNA慢病毒併達到較高的沉默效率,為下一步研究沉默靶基因後細胞生物學功能變化提供實驗基礎.
목적:구건휴재인백개소-8(IL-8)shRNA적만병독병감정기대MDA-MB-231세포해기인적침묵효솔.방법:설계량개IL-8기인특이성siRNA파점,여pMagic7.1만병독재체질립중조,경PCR감정병측서,통과293T세포실현만병독포장,DNA정량시제합분별검측량충만병독적도.장저량충만병독분별이최가감염복수감염MDA-MB-231세포,통과Real-time PCR검측IL-8침묵효솔.결과:PCR감정양성적shRNA중조질립측서정학,포장후량충병독적도분별위1.93×109 IU/mL화1.89×109 IU/mL;분별이MOI=40감염MDA-MB-231세포후,IL-8침묵효솔분별위80％화90％.결론:성공구건IL-8 shRNA만병독병체도교고적침묵효솔,위하일보연구침묵파기인후세포생물학공능변화제공실험기출.
