中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2014年
5期
507-510,520
,共5页
徐义刚%李丹丹%刘忠梅%吴岩%李苏龙
徐義剛%李丹丹%劉忠梅%吳巖%李囌龍
서의강%리단단%류충매%오암%리소룡
小肠结肠炎耶尔森氏菌%16S-23S rRNA%DPO-PCR
小腸結腸炎耶爾森氏菌%16S-23S rRNA%DPO-PCR
소장결장염야이삼씨균%16S-23S rRNA%DPO-PCR
Yersinia enterocolitica%16S-23S rRNA%DPO-PCR
目的 引入一种设计简易、特异性强、退火温度范围宽的双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)设计,建立基于DPO引物特异性检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的PCR方法.方法 以小肠结肠炎耶尔森氏菌16S 23SrRNA基因为靶基因,设计一对DPO引物,经过PCR反应体系优化,建立小肠结肠炎耶尔森氏菌DPO-PCR检测方法.测定了检测灵敏度,以常规PCR方法作为参照,分析DP&PCR方法的特异性及退火温度.结果 建立的小肠结肠炎耶尔森氏菌DPO-PCR检测方法的灵敏度为1.43×102 CFU/mL;与常规PCR方法相比,DP&PCR方法在49～69℃退火温度范围内均能保持高效率扩增;特异性强,所测试17种病原菌中,仅小肠结肠炎耶尔森氏菌为阳性结果,且无非特异性扩增.结论 DPO-PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度进行优化,特异性强,为致病微生物的快速准确检测提供了新方法.
目的 引入一種設計簡易、特異性彊、退火溫度範圍寬的雙啟動寡覈苷痠引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)設計,建立基于DPO引物特異性檢測小腸結腸炎耶爾森氏菌的PCR方法.方法 以小腸結腸炎耶爾森氏菌16S 23SrRNA基因為靶基因,設計一對DPO引物,經過PCR反應體繫優化,建立小腸結腸炎耶爾森氏菌DPO-PCR檢測方法.測定瞭檢測靈敏度,以常規PCR方法作為參照,分析DP&PCR方法的特異性及退火溫度.結果 建立的小腸結腸炎耶爾森氏菌DPO-PCR檢測方法的靈敏度為1.43×102 CFU/mL;與常規PCR方法相比,DP&PCR方法在49～69℃退火溫度範圍內均能保持高效率擴增;特異性彊,所測試17種病原菌中,僅小腸結腸炎耶爾森氏菌為暘性結果,且無非特異性擴增.結論 DPO-PCR方法不需要對引物參數特彆是退火溫度進行優化,特異性彊,為緻病微生物的快速準確檢測提供瞭新方法.
목적 인입일충설계간역、특이성강、퇴화온도범위관적쌍계동과핵감산인물(dual-priming oligonucleotide,DPO)설계,건립기우DPO인물특이성검측소장결장염야이삼씨균적PCR방법.방법 이소장결장염야이삼씨균16S 23SrRNA기인위파기인,설계일대DPO인물,경과PCR반응체계우화,건립소장결장염야이삼씨균DPO-PCR검측방법.측정료검측령민도,이상규PCR방법작위삼조,분석DP&PCR방법적특이성급퇴화온도.결과 건립적소장결장염야이삼씨균DPO-PCR검측방법적령민도위1.43×102 CFU/mL;여상규PCR방법상비,DP&PCR방법재49～69℃퇴화온도범위내균능보지고효솔확증;특이성강,소측시17충병원균중,부소장결장염야이삼씨균위양성결과,차무비특이성확증.결론 DPO-PCR방법불수요대인물삼수특별시퇴화온도진행우화,특이성강,위치병미생물적쾌속준학검측제공료신방법.
