CAJ | 학술논문

目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1).方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析.将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达.利用实时荧光定量RT-PCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异.结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260 bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332 bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95％和90％.两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上.以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒.SDS-PAGE结果显示目的基因在Ori-gami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000 Da,经亲和层析获得目的蛋白.组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P＞0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P＜0.05).结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白.
목적 극륭병원핵표체백문이문타액선사안산단백매억제제기인1(Aalbserpin-1).방법 근거NCBI망참상백문이문Aalbserpin-1(AY826096.1)적서렬설계인물,용RT-PCR종백문이문엄주주중획취Aalbserpin-1전장기인서렬,병진행생물신식학분석.장목적편단극륭도원핵표체재체pET28a(+),전화도대장간균중유도표체.이용실시형광정량RT-PCR분석Aalbserpin-1_2기인재백문이문불동조직중적표체차이.결과 PCR확증획득Aalbserpin-1기인량개전록본(Aalbserpin1_1화Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1적기인서렬위1 260 bp,편마419개안기산;Aalbserpin1_2적기인서렬위1 332 bp,편마443개안기산,균구유seprin결구역,Aalbserpin1_1화Aalbserpin1_2여Aalbserpin-1(AY826096.1)상비,상사성분별위95％화90％.량개전록본비교,Aalbserpin1_2중함유24개안기산적가변전접자정호위우기공능활성중심배(RCL)상.이Aalbserpin1_2서렬위모판,성공구건pET28a-Aalbserpin-1_2중조질립.SDS-PAGE결과현시목적기인재Ori-gami(DE3)중표체,중조단백상대분자량(Mr)약위50 000 Da,경친화층석획득목적단백.조직표체보현시Aalbserpin-1_2재타액선(SG)、중장(MG,P＞0.05)봉부표체,지방체저표체(FB,P＜0.05).결론 백문이문엄주주Aalbserpin-1기인구유량개가변전접자,기중Aalbserpin-1_2재타액선、중장봉부표체,성공구건pET28a-Aalbserpin-1_2중조질립병획득중조단백.