CAJ | 학술논문

本研究观察不同的细胞刺激因子共刺激对人CIK细胞增殖和功能的影响.用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMNC),按常规方法从PBMNC培养细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞),然后根据加入CD28 mAb、IL-15和IL-21将实验分为5组:对照组(CIK),CB28+ IL-15+ IL-21组,IL-15+ IL-21组,CD28+ IL-15组和CD28+ IL-21组.用全自动五分类血液分析仪计数CIK细胞的增殖能力;用流式细胞术测定细胞刺激因子诱导的CIK细胞的粒酶B(granzyme B),穿孔蛋白(pefforin)和CD107α 等分子的变化;用ELISA法检测细胞因子IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α的含量;乳酸脱氢酶释放法测定细胞刺激因子共刺激的细胞对人肺癌细胞株A549(A549)、乳腺癌细胞株MFC-7(MFC-7)和人黑素瘤细胞株HME1(HME1)的杀伤活性.结果表明,在CIK细胞培养体系中加入不同的刺激因子,细胞增殖能力有明显的差异,以含CD28、IL-15和IL-21组细胞增殖倍数最高,在培养第10日时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于对照组,IL-21+ IL-15组和CD28+ IL-21组细胞增殖倍数分别为166.6±13.5、199.4±15.0和228.8±16.6(P＜0.05),添加CD28和IL-15组则穿孔蛋白含量明显高于其他组.所有共刺激组的穿孔蛋白、粒酶B和CD107a表达百分率均明显高于对照组(P＜0.05).对A549、MFC-7和HME1细胞杀伤活性以含CD28+ IL-15组最高(82.2％、59.3％和70.6％),明显高于对照组(60.9％、49.6％和48.4％)(P＜0.05).在CIK细胞培养体系中增加CD28+ IL-15+ IL-21组中细胞分泌IFN-γ量显著高于其他各组(P＜0.05).结论:不同刺激因子活化的CIK细胞的增殖能力、分泌细胞因子和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的细胞刺激因子对细胞功能定向培养有一定意义.
본연구관찰불동적세포자격인자공자격대인CIK세포증식화공능적영향.용림파세포분리액분리인외주혈단개핵세포(PBMNC),안상규방법종PBMNC배양세포인자유도적살상세포(CIK세포),연후근거가입CD28 mAb、IL-15화IL-21장실험분위5조:대조조(CIK),CB28+ IL-15+ IL-21조,IL-15+ IL-21조,CD28+ IL-15조화CD28+ IL-21조.용전자동오분류혈액분석의계수CIK세포적증식능력;용류식세포술측정세포자격인자유도적CIK세포적립매B(granzyme B),천공단백(pefforin)화CD107α 등분자적변화;용ELISA법검측세포인자IL-10、IL-12、INF-γ화TNF-α적함량;유산탈경매석방법측정세포자격인자공자격적세포대인폐암세포주A549(A549)、유선암세포주MFC-7(MFC-7)화인흑소류세포주HME1(HME1)적살상활성.결과표명,재CIK세포배양체계중가입불동적자격인자,세포증식능력유명현적차이,이함CD28、IL-15화IL-21조세포증식배수최고,재배양제10일시해조적증식배수위255.3±6.3,명현고우대조조,IL-21+ IL-15조화CD28+ IL-21조세포증식배수분별위166.6±13.5、199.4±15.0화228.8±16.6(P＜0.05),첨가CD28화IL-15조칙천공단백함량명현고우기타조.소유공자격조적천공단백、립매B화CD107a표체백분솔균명현고우대조조(P＜0.05).대A549、MFC-7화HME1세포살상활성이함CD28+ IL-15조최고(82.2％、59.3％화70.6％),명현고우대조조(60.9％、49.6％화48.4％)(P＜0.05).재CIK세포배양체계중증가CD28+ IL-15+ IL-21조중세포분비IFN-γ량현저고우기타각조(P＜0.05).결론:불동자격인자활화적CIK세포적증식능력、분비세포인자화살상활성유명현차이,재배양체계중증가상응적세포자격인자대세포공능정향배양유일정의의.