大豆科学
大豆科學
대두과학
SOYBEAN SCIENCE
2012年
6期
882-886
,共5页
武林%王艳%孙梦阳%赵雪%韩英鹏%滕卫丽%李文滨
武林%王豔%孫夢暘%趙雪%韓英鵬%滕衛麗%李文濱
무림%왕염%손몽양%조설%한영붕%등위려%리문빈
大豆%Fad3a%SNP%HRM体系优化
大豆%Fad3a%SNP%HRM體繫優化
대두%Fad3a%SNP%HRM체계우화
高分辨率熔解曲线分析法可准确检测单核苷酸多态性,具有稳定性和高效性的特点.建立基于HRM的SNP检测方法,确立最佳的反应体系和反应条件是后续基因分型研究的前提和基础.Fad3a基因为大豆脂肪酸合成的关键酶基因,以Fad3a基因为研究对象,通过测序获得大豆品种合丰25(亚麻酸含量5.94％)和L-5(亚麻酸含量2.75％)在Fad3a基因序列上的单核苷酸多态性位点,根据这2个品种的Fad3a基因测序结果,利用Lighter scanner primer design软件设计产物长度不同的SNP突变引物5对,探索PCR产物长度和不同的退火温度对HRM分型结果的影响.结果表明:HRM分型的扩增子适宜长度应小于150 bp,且在扩增成功的基础上使用相对较高的退火温度可使待测PCR产物熔解峰单一,熔解曲线平稳.
高分辨率鎔解麯線分析法可準確檢測單覈苷痠多態性,具有穩定性和高效性的特點.建立基于HRM的SNP檢測方法,確立最佳的反應體繫和反應條件是後續基因分型研究的前提和基礎.Fad3a基因為大豆脂肪痠閤成的關鍵酶基因,以Fad3a基因為研究對象,通過測序穫得大豆品種閤豐25(亞痳痠含量5.94％)和L-5(亞痳痠含量2.75％)在Fad3a基因序列上的單覈苷痠多態性位點,根據這2箇品種的Fad3a基因測序結果,利用Lighter scanner primer design軟件設計產物長度不同的SNP突變引物5對,探索PCR產物長度和不同的退火溫度對HRM分型結果的影響.結果錶明:HRM分型的擴增子適宜長度應小于150 bp,且在擴增成功的基礎上使用相對較高的退火溫度可使待測PCR產物鎔解峰單一,鎔解麯線平穩.
고분변솔용해곡선분석법가준학검측단핵감산다태성,구유은정성화고효성적특점.건립기우HRM적SNP검측방법,학립최가적반응체계화반응조건시후속기인분형연구적전제화기출.Fad3a기인위대두지방산합성적관건매기인,이Fad3a기인위연구대상,통과측서획득대두품충합봉25(아마산함량5.94％)화L-5(아마산함량2.75％)재Fad3a기인서렬상적단핵감산다태성위점,근거저2개품충적Fad3a기인측서결과,이용Lighter scanner primer design연건설계산물장도불동적SNP돌변인물5대,탐색PCR산물장도화불동적퇴화온도대HRM분형결과적영향.결과표명:HRM분형적확증자괄의장도응소우150 bp,차재확증성공적기출상사용상대교고적퇴화온도가사대측PCR산물용해봉단일,용해곡선평은.
