中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2012年
6期
522-527
,共6页
曹锡梅%梁俊红%张潮%万东方%蒙晓平%郭大玮
曹錫梅%樑俊紅%張潮%萬東方%矇曉平%郭大瑋
조석매%량준홍%장조%만동방%몽효평%곽대위
均匀设计%RT-qPCR%内参基因%THP-1%条件优化
均勻設計%RT-qPCR%內參基因%THP-1%條件優化
균균설계%RT-qPCR%내삼기인%THP-1%조건우화
目的 探讨均匀设计在候选内参基因RT-qPCR实验条件优化中的应用,有助于后期实验筛选不同状态下THP-1细胞的稳定内参基因.方法 以THP 1细胞cDNA为模板,cDNA模板量、引物浓度和退火温度3个因素为影响因素,应用均匀设计3因素8水平,探索影响候选内参基因RT-qPCR的扩增条件,检测不同实验条件下的扩增效果,在最优扩增条件下建立候选内参基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率.结果 通过均匀设计,完成对cDNA模板量、引物浓度和退火温度3因素8水平的实验条件优化,建立候选内参基因RT-qPCR检测的最佳组合为cDNA模板量0.5μg、引物浓度200μmol/L、退火温度55℃.结论 本实验选用均匀设计优化RT-qPCR实验条件,筛选出THP 1细胞候选内参基因RT-qPCR的最优实验条件.均匀设计适合于本实验研究多因素多水平试验条件的配比.
目的 探討均勻設計在候選內參基因RT-qPCR實驗條件優化中的應用,有助于後期實驗篩選不同狀態下THP-1細胞的穩定內參基因.方法 以THP 1細胞cDNA為模闆,cDNA模闆量、引物濃度和退火溫度3箇因素為影響因素,應用均勻設計3因素8水平,探索影響候選內參基因RT-qPCR的擴增條件,檢測不同實驗條件下的擴增效果,在最優擴增條件下建立候選內參基因定量擴增的相對標準麯線,併檢測擴增效率.結果 通過均勻設計,完成對cDNA模闆量、引物濃度和退火溫度3因素8水平的實驗條件優化,建立候選內參基因RT-qPCR檢測的最佳組閤為cDNA模闆量0.5μg、引物濃度200μmol/L、退火溫度55℃.結論 本實驗選用均勻設計優化RT-qPCR實驗條件,篩選齣THP 1細胞候選內參基因RT-qPCR的最優實驗條件.均勻設計適閤于本實驗研究多因素多水平試驗條件的配比.
목적 탐토균균설계재후선내삼기인RT-qPCR실험조건우화중적응용,유조우후기실험사선불동상태하THP-1세포적은정내삼기인.방법 이THP 1세포cDNA위모판,cDNA모판량、인물농도화퇴화온도3개인소위영향인소,응용균균설계3인소8수평,탐색영향후선내삼기인RT-qPCR적확증조건,검측불동실험조건하적확증효과,재최우확증조건하건립후선내삼기인정량확증적상대표준곡선,병검측확증효솔.결과 통과균균설계,완성대cDNA모판량、인물농도화퇴화온도3인소8수평적실험조건우화,건립후선내삼기인RT-qPCR검측적최가조합위cDNA모판량0.5μg、인물농도200μmol/L、퇴화온도55℃.결론 본실험선용균균설계우화RT-qPCR실험조건,사선출THP 1세포후선내삼기인RT-qPCR적최우실험조건.균균설계괄합우본실험연구다인소다수평시험조건적배비.
