CAJ | 학술논문

[目的]通过比较hESC在各培养体系中未分化表面标记物及以多能性因子的表达,进一步筛选出更优化、安全有效的hESC培养体系.[方法]四种培养体系分别为:新建立的无动物源性的人包皮饲养层(XF-HFF)联合成分确定培养基(CDM)的无动物源性培养体系(XF-HFF/CDM),对照组为XF-HFF联合添加了200 mL/L人血清(HS)的培养基的培养体系(XF-HFF/HS),HS包被的培养皿联合CDM的无饲养层培养体系(HS-Matrix/CDM),以及传统的人包皮饲养层(XC-HFF)联合添加了200 mL/L血清替代物(KSR)的培养基的培养体系.通过观察克隆形态、细胞计数、免疫荧光、流式细胞术、荧光定量PCR,来比较4种hESC培养体系中的细胞增殖率、未分化表面标记物和多能性因子的表达情况,以及hESC在XF-HFF/CDM培养体系中长期培养后,对其未分化状态、多能性和染色体完整性的检测.[结果]在几种培养体系中,同一代次的hESC表达SSEA-4、TR A-1-60、Oct3/4和hTERT的情况在XF-HFF/CDM组和XC-HFF/KSR组中相似(P＞0.O1),且均高于其它两组培养体系(P＜0.01).hESC在XF-HFF/CDM培养体系中长期培养超过40代次,仍能表达hESC未分化表面标记物SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81及多能性因子hTERT、Oct3/4,在SCID小鼠体内能分化成含3个胚层的畸胎瘤,以及保持完整的二倍体核型.[结论]新构建的完全无动物源性的hESC培养体系的培养效率与传统添加KSR的培养体系相似,且优于相同CDM下的无饲养层培养体系以及相同饲养层下的含人血清的干细胞培养条件.
[목적]통과비교hESC재각배양체계중미분화표면표기물급이다능성인자적표체,진일보사선출경우화、안전유효적hESC배양체계.[방법]사충배양체계분별위:신건립적무동물원성적인포피사양층(XF-HFF)연합성분학정배양기(CDM)적무동물원성배양체계(XF-HFF/CDM),대조조위XF-HFF연합첨가료200 mL/L인혈청(HS)적배양기적배양체계(XF-HFF/HS),HS포피적배양명연합CDM적무사양층배양체계(HS-Matrix/CDM),이급전통적인포피사양층(XC-HFF)연합첨가료200 mL/L혈청체대물(KSR)적배양기적배양체계.통과관찰극륭형태、세포계수、면역형광、류식세포술、형광정량PCR,래비교4충hESC배양체계중적세포증식솔、미분화표면표기물화다능성인자적표체정황,이급hESC재XF-HFF/CDM배양체계중장기배양후,대기미분화상태、다능성화염색체완정성적검측.[결과]재궤충배양체계중,동일대차적hESC표체SSEA-4、TR A-1-60、Oct3/4화hTERT적정황재XF-HFF/CDM조화XC-HFF/KSR조중상사(P＞0.O1),차균고우기타량조배양체계(P＜0.01).hESC재XF-HFF/CDM배양체계중장기배양초과40대차,잉능표체hESC미분화표면표기물SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81급다능성인자hTERT、Oct3/4,재SCID소서체내능분화성함3개배층적기태류,이급보지완정적이배체핵형.[결론]신구건적완전무동물원성적hESC배양체계적배양효솔여전통첨가KSR적배양체계상사,차우우상동CDM하적무사양층배양체계이급상동사양층하적함인혈청적간세포배양조건.