中南林业科技大学学报
中南林業科技大學學報
중남임업과기대학학보
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY OF FORESTRY & TECHNOLOGY
2012年
11期
115-121
,共7页
田宏现%苑平%王曼玲%刘艺%李菁%夏新界%谭晓风
田宏現%苑平%王曼玲%劉藝%李菁%夏新界%譚曉風
전굉현%원평%왕만령%류예%리정%하신계%담효풍
猕猴桃%ACC氧化酶%农杆菌介导%反义表达载体
獼猴桃%ACC氧化酶%農桿菌介導%反義錶達載體
미후도%ACC양화매%농간균개도%반의표체재체
为建立猕猴桃ACC氧化酶反义基因功能研究技术平台并通过生物技术改良猕猴桃,从海沃德猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.var.deliciosa‘Hayward’)叶片中提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,并以此为模板,扩增得到ACC氧化酶(ACO)基因片段约1 kb,经限制性内切酶图谱分析,组建亚克隆并进行测序,其开放阅读框长957 bp,编码319个氨基酸,与其他已公布的ACC氧化酶cDNA的核苷酸(AB003514.1)及氨基酸序列(BAA21541.1)同源率分别高达94.0％和95.6％,证明所克隆的cDNA序列的准确性.构建该基因的反义表达载体,并通过农杆菌介导的方法成功转化米良一号猕猴桃(Actinidia deliciosa cv.Miliang-1),得到再生苗.取14株经PCR检测,其中10株检测到ACC氧化酶基因目的条带,阳性植株占71.4％.实时荧光定量PCR分析结果显示,再生苗ACO基因的表达量低于野生型58％～81％.
為建立獼猴桃ACC氧化酶反義基因功能研究技術平檯併通過生物技術改良獼猴桃,從海沃德獼猴桃(Actinidia chinensis Planch.var.deliciosa‘Hayward’)葉片中提取總RNA,反轉錄閤成cDNA第一鏈,併以此為模闆,擴增得到ACC氧化酶(ACO)基因片段約1 kb,經限製性內切酶圖譜分析,組建亞剋隆併進行測序,其開放閱讀框長957 bp,編碼319箇氨基痠,與其他已公佈的ACC氧化酶cDNA的覈苷痠(AB003514.1)及氨基痠序列(BAA21541.1)同源率分彆高達94.0％和95.6％,證明所剋隆的cDNA序列的準確性.構建該基因的反義錶達載體,併通過農桿菌介導的方法成功轉化米良一號獼猴桃(Actinidia deliciosa cv.Miliang-1),得到再生苗.取14株經PCR檢測,其中10株檢測到ACC氧化酶基因目的條帶,暘性植株佔71.4％.實時熒光定量PCR分析結果顯示,再生苗ACO基因的錶達量低于野生型58％～81％.
위건립미후도ACC양화매반의기인공능연구기술평태병통과생물기술개량미후도,종해옥덕미후도(Actinidia chinensis Planch.var.deliciosa‘Hayward’)협편중제취총RNA,반전록합성cDNA제일련,병이차위모판,확증득도ACC양화매(ACO)기인편단약1 kb,경한제성내절매도보분석,조건아극륭병진행측서,기개방열독광장957 bp,편마319개안기산,여기타이공포적ACC양화매cDNA적핵감산(AB003514.1)급안기산서렬(BAA21541.1)동원솔분별고체94.0％화95.6％,증명소극륭적cDNA서렬적준학성.구건해기인적반의표체재체,병통과농간균개도적방법성공전화미량일호미후도(Actinidia deliciosa cv.Miliang-1),득도재생묘.취14주경PCR검측,기중10주검측도ACC양화매기인목적조대,양성식주점71.4％.실시형광정량PCR분석결과현시,재생묘ACO기인적표체량저우야생형58％～81％.
