动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2012年
11期
31-36
,共6页
姚俊%李富祥%彭海生%鲁富有%张乔明%李华春
姚俊%李富祥%彭海生%魯富有%張喬明%李華春
요준%리부상%팽해생%로부유%장교명%리화춘
羊口疮病毒%TaqMan%实时荧光定量PCR%建立%应用
羊口瘡病毒%TaqMan%實時熒光定量PCR%建立%應用
양구창병독%TaqMan%실시형광정량PCR%건립%응용
根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264) ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法.该方法组内及组间重复试验变异系数均低于2％,上机检测时间不超过40 min,检测灵敏度达1×101 copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特异性检测均为阴性,标准曲线的相关系数(R2)为0.998 088,线性关系良好.应用该方法对云南保山和普洱送检的羊口疮临床组织病料进行绝对定量检测,送检样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.35×108 copies/μL和9.62×107 copies/μL.结果表明,研究建立的羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、稳定、快速和安全的特点,适于羊口疮临床组织样品的早期检测及常规病原监测.
根據GenBank中的羊口瘡病毒基因組(AY386264) ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,應用Beacon Designer 7.7軟件設計一對引物和一條TaqMan探針,以含有該引物擴增序列的重組質粒作為暘性標準品,建立瞭羊口瘡病毒TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法.該方法組內及組間重複試驗變異繫數均低于2％,上機檢測時間不超過40 min,檢測靈敏度達1×101 copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特異性檢測均為陰性,標準麯線的相關繫數(R2)為0.998 088,線性關繫良好.應用該方法對雲南保山和普洱送檢的羊口瘡臨床組織病料進行絕對定量檢測,送檢樣品抽提DNA中病毒拷貝數分彆為1.35×108 copies/μL和9.62×107 copies/μL.結果錶明,研究建立的羊口瘡病毒TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法具有特異、靈敏、穩定、快速和安全的特點,適于羊口瘡臨床組織樣品的早期檢測及常規病原鑑測.
근거GenBank중적양구창병독기인조(AY386264) ORFVgORF121급ORFVgORF122기인적DNA서렬,응용Beacon Designer 7.7연건설계일대인물화일조TaqMan탐침,이함유해인물확증서렬적중조질립작위양성표준품,건립료양구창병독TaqMan실시형광정량PCR검측방법.해방법조내급조간중복시험변이계수균저우2％,상궤검측시간불초과40 min,검측령민도체1×101 copies/μL,산양두급금두병독특이성검측균위음성,표준곡선적상관계수(R2)위0.998 088,선성관계량호.응용해방법대운남보산화보이송검적양구창림상조직병료진행절대정량검측,송검양품추제DNA중병독고패수분별위1.35×108 copies/μL화9.62×107 copies/μL.결과표명,연구건립적양구창병독TaqMan실시형광정량PCR검측방법구유특이、령민、은정、쾌속화안전적특점,괄우양구창림상조직양품적조기검측급상규병원감측.
