CAJ | 학술논문

原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较.根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP Flury株M基因序列设计特异性引物并引入Sma Ⅰ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR(R)2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用Sma Ⅰ和NotⅠ进行双酶切,酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-RV-M.将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大,且主要以可溶性的形式表达.亲和层析纯化目的蛋白,Western blot表明融合蛋白具有良好的反应原性,使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清,同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV-His-P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清.结果表明:与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比,使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率,能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法.
원핵표체광견병병독적기질단백(M),병이차작위포피항원건립간접ELISA검측방법,여이광견병병독린단백(P)작위포피항원건립적간접ELISA방법진행비교.근거GenBank중공포적광견병병독LEP Flury주M기인서렬설계특이성인물병인입Sma Ⅰ화NotⅠ매절위점,경RT-PCR확증득도목적기인,련접pCR(R)2.1재체,구건중조질립pCR-RV-M,중조질립용Sma Ⅰ화NotⅠ진행쌍매절,매절산물정향극륭지원핵표체재체pGEX-6P-1중,구건중조표체재체pGEX-RV-M.장중조표체재체전화E.coli BL21(DE3)감수태세포,사용IPTG유도표체목적단백,SDS-PAGE분석표명단백표체량교대,차주요이가용성적형식표체.친화층석순화목적단백,Western blot표명융합단백구유량호적반응원성,사용순화적융합단백작위포피항원건립료간접ELISA방법병검측료95빈혈청,동시사용대유His표첨적중조광견병병독린단백P(RV-His-P)건립적ELISA방법화상품화적ELISA시제합검측해혈청.결과표명:여상품화적이전병독작위포피항원적ELISA검측시제합상비,사용중조P단백작위포피항원건립적간접ELISA검측방법구유경고적부합솔,능구대체전병독작위진단항원건립검측방법.