转化医学杂志
轉化醫學雜誌
전화의학잡지
TRANSLATIONAL MEDICINE JOURNAL
2012年
2期
73-78
,共6页
辛洪奎%张超%王德利%吴剑宏%王超峰%何勍%阮狄克
辛洪奎%張超%王德利%吳劍宏%王超峰%何勍%阮狄剋
신홍규%장초%왕덕리%오검굉%왕초봉%하경%원적극
髓核细胞%人端粒酶逆转录酶%基因转染
髓覈細胞%人耑粒酶逆轉錄酶%基因轉染
수핵세포%인단립매역전록매%기인전염
目的 观察2型重组腺相关病毒-人端粒酶逆转录酶(recombinant adeno-associated virus type-2 human telomerase reverse transcriptase,rAAV2-hTERT)病毒载体转染对犬髓核细胞生物学活性的影响.方法 实验组常规分离犬髓核细胞,rAAV2-hTERT病毒载体以1×105 v.g/cell的复合感染转染犬髓核细胞.在转染后5、10、15、30 d及60 d分别以反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot方法检测髓核细胞中hTERT mRNA及蛋白的表达;利用实时定量PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分别检测髓核细胞蛋白多糖(proteoglycan,PG)、Ⅰ型和Ⅱ型胶原(collagen type Ⅱ,COL2)mRNA及蛋白表达量.所有检测均与2型重组腺相关病毒-增强绿色荧光蛋白(recombinant adeno-associated virus type-2 enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染的髓核细胞(对照组)进行对比.结果 rAAV2可成功转染犬髓核细胞,在转染后5、10、15、30 d以及60 d,均可于基因和蛋白水平检测到hTERT基因在髓核细胞内的表达;而在所有观察时间点内,对照组未能检测到hTERT基因表达.RT-PCR显示在转染后的10~60 d,实验组PG、COL2 mRNA的表达量明显高于对照组细胞的mRNA表达,实验组与对照组在COL1 mRNA表达上无明显差别.ELISA测定蛋白多糖及COL2表达量提示:在转染后10 d,实验组髓核细胞PG、COL2的表达量显著增加;在转染后的10~60 d,实验组髓核细胞PG、COL2的表达量均明显高于对照组.结论 使用rAAV2-hTERT病毒转染可成功实现体外培养条件下髓核细胞增殖能力及细胞外基质表达的上调,这将有可能为椎间盘退行性疾病的生物治疗提供更为理想的种子细胞选择.
目的 觀察2型重組腺相關病毒-人耑粒酶逆轉錄酶(recombinant adeno-associated virus type-2 human telomerase reverse transcriptase,rAAV2-hTERT)病毒載體轉染對犬髓覈細胞生物學活性的影響.方法 實驗組常規分離犬髓覈細胞,rAAV2-hTERT病毒載體以1×105 v.g/cell的複閤感染轉染犬髓覈細胞.在轉染後5、10、15、30 d及60 d分彆以反轉錄聚閤酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot方法檢測髓覈細胞中hTERT mRNA及蛋白的錶達;利用實時定量PCR、酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分彆檢測髓覈細胞蛋白多糖(proteoglycan,PG)、Ⅰ型和Ⅱ型膠原(collagen type Ⅱ,COL2)mRNA及蛋白錶達量.所有檢測均與2型重組腺相關病毒-增彊綠色熒光蛋白(recombinant adeno-associated virus type-2 enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)轉染的髓覈細胞(對照組)進行對比.結果 rAAV2可成功轉染犬髓覈細胞,在轉染後5、10、15、30 d以及60 d,均可于基因和蛋白水平檢測到hTERT基因在髓覈細胞內的錶達;而在所有觀察時間點內,對照組未能檢測到hTERT基因錶達.RT-PCR顯示在轉染後的10~60 d,實驗組PG、COL2 mRNA的錶達量明顯高于對照組細胞的mRNA錶達,實驗組與對照組在COL1 mRNA錶達上無明顯差彆.ELISA測定蛋白多糖及COL2錶達量提示:在轉染後10 d,實驗組髓覈細胞PG、COL2的錶達量顯著增加;在轉染後的10~60 d,實驗組髓覈細胞PG、COL2的錶達量均明顯高于對照組.結論 使用rAAV2-hTERT病毒轉染可成功實現體外培養條件下髓覈細胞增殖能力及細胞外基質錶達的上調,這將有可能為椎間盤退行性疾病的生物治療提供更為理想的種子細胞選擇.
목적 관찰2형중조선상관병독-인단립매역전록매(recombinant adeno-associated virus type-2 human telomerase reverse transcriptase,rAAV2-hTERT)병독재체전염대견수핵세포생물학활성적영향.방법 실험조상규분리견수핵세포,rAAV2-hTERT병독재체이1×105 v.g/cell적복합감염전염견수핵세포.재전염후5、10、15、30 d급60 d분별이반전록취합매련반응(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot방법검측수핵세포중hTERT mRNA급단백적표체;이용실시정량PCR、매련면역흡부측정(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)법분별검측수핵세포단백다당(proteoglycan,PG)、Ⅰ형화Ⅱ형효원(collagen type Ⅱ,COL2)mRNA급단백표체량.소유검측균여2형중조선상관병독-증강록색형광단백(recombinant adeno-associated virus type-2 enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)전염적수핵세포(대조조)진행대비.결과 rAAV2가성공전염견수핵세포,재전염후5、10、15、30 d이급60 d,균가우기인화단백수평검측도hTERT기인재수핵세포내적표체;이재소유관찰시간점내,대조조미능검측도hTERT기인표체.RT-PCR현시재전염후적10~60 d,실험조PG、COL2 mRNA적표체량명현고우대조조세포적mRNA표체,실험조여대조조재COL1 mRNA표체상무명현차별.ELISA측정단백다당급COL2표체량제시:재전염후10 d,실험조수핵세포PG、COL2적표체량현저증가;재전염후적10~60 d,실험조수핵세포PG、COL2적표체량균명현고우대조조.결론 사용rAAV2-hTERT병독전염가성공실현체외배양조건하수핵세포증식능력급세포외기질표체적상조,저장유가능위추간반퇴행성질병적생물치료제공경위이상적충자세포선택.
