中国急救医学
中國急救醫學
중국급구의학
CHINESE JOURNAL OF CRITICAL CARE MEDICINE
2012年
12期
1109-1112
,共4页
陈凉%刘怡晟%蒋更如%张征%潘曙明
陳涼%劉怡晟%蔣更如%張徵%潘曙明
진량%류이성%장경여%장정%반서명
尿素转运蛋白B(UT-B)%基因克隆%载体构建%大鼠%尿毒症
尿素轉運蛋白B(UT-B)%基因剋隆%載體構建%大鼠%尿毒癥
뇨소전운단백B(UT-B)%기인극륭%재체구건%대서%뇨독증
目的 克隆SD大鼠尿素转运蛋白B(urea transporter B,UT-B)的CDS全长基因并构建其真核表达载体.方法 从SD大鼠肾髓质中提取总RNA并经逆转录反应获取总cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增UT-B基因的CDS区全长片段,PCR产物加"A"尾后克隆至pMD-18T克隆载体,双酶切后获取UT-B片段,T4 DNA连接酶将UT-B片段与Kpn I和Bam HI双酶切后的真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建大鼠UT-B真核表达载体pcDNA3.1(-)-UT-B.结果 成功克隆了SD大鼠UT-B基因,构建的pcDNA3.1(-)-UT-B载体经PCR扩增、Kpn I和Bam HI双酶切鉴定及测序验证,表达载体包含UT-B基因,且UT-B碱基序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致.结论 成功克隆了该基因并构建了其真核表达载体pcDNA3.1(-)-UT-B,为进一步进行UT-B基因转染治疗尿毒症的研究奠定了基础.
目的 剋隆SD大鼠尿素轉運蛋白B(urea transporter B,UT-B)的CDS全長基因併構建其真覈錶達載體.方法 從SD大鼠腎髓質中提取總RNA併經逆轉錄反應穫取總cDNA,以cDNA為模闆,PCR擴增UT-B基因的CDS區全長片段,PCR產物加"A"尾後剋隆至pMD-18T剋隆載體,雙酶切後穫取UT-B片段,T4 DNA連接酶將UT-B片段與Kpn I和Bam HI雙酶切後的真覈錶達載體pcDNA3.1(-)連接,構建大鼠UT-B真覈錶達載體pcDNA3.1(-)-UT-B.結果 成功剋隆瞭SD大鼠UT-B基因,構建的pcDNA3.1(-)-UT-B載體經PCR擴增、Kpn I和Bam HI雙酶切鑒定及測序驗證,錶達載體包含UT-B基因,且UT-B堿基序列與GeneBank中收錄的大鼠UT-B序列一緻.結論 成功剋隆瞭該基因併構建瞭其真覈錶達載體pcDNA3.1(-)-UT-B,為進一步進行UT-B基因轉染治療尿毒癥的研究奠定瞭基礎.
목적 극륭SD대서뇨소전운단백B(urea transporter B,UT-B)적CDS전장기인병구건기진핵표체재체.방법 종SD대서신수질중제취총RNA병경역전록반응획취총cDNA,이cDNA위모판,PCR확증UT-B기인적CDS구전장편단,PCR산물가"A"미후극륭지pMD-18T극륭재체,쌍매절후획취UT-B편단,T4 DNA련접매장UT-B편단여Kpn I화Bam HI쌍매절후적진핵표체재체pcDNA3.1(-)련접,구건대서UT-B진핵표체재체pcDNA3.1(-)-UT-B.결과 성공극륭료SD대서UT-B기인,구건적pcDNA3.1(-)-UT-B재체경PCR확증、Kpn I화Bam HI쌍매절감정급측서험증,표체재체포함UT-B기인,차UT-B감기서렬여GeneBank중수록적대서UT-B서렬일치.결론 성공극륭료해기인병구건료기진핵표체재체pcDNA3.1(-)-UT-B,위진일보진행UT-B기인전염치료뇨독증적연구전정료기출.
