CAJ | 학술논문

目的采用聚氧乙烯辛烷基酚(Triton X-100)去除周围神经中的雪旺细胞和髓鞘,制取天然神经细胞外基质,构建组织工程化神经移植体.方法健康新西兰大耳白兔30只,分别自梨状肌下缘水平以远切取10 mm双侧坐骨神经60根,随机分为A(12h组)、B(24 h组)、C(48 h组)、D(96 h组)、E(1 w组)用于化学萃取,F(新鲜神经)为对照组.5组神经Triton X-100萃取时间分别为12 h、24 h、48 h、96 h、1 w.在新鲜神经和萃取后的神经中段分别切取1段2 mm神经,10％甲醛固定,常规石蜡包埋、纵形切片,行HE染色、磷钨酸苏木素(PTAH)染色、阿尔辛蓝(Alcian blue)染色、层黏连蛋白(Laminin)免疫组化染色.在光镜下对各组神经进行观察.结果光镜下对各组神经进行观察,新鲜神经可见雪旺细胞分布均匀,髓鞘、基底膜排列整齐.随着萃取时间的延长雪旺细胞、髓鞘逐渐减少,髓鞘与基底膜的界限不清,至96 h时神经雪旺细胞、髓鞘消失,纵切片上基底膜呈栅栏样排列,膜与膜之间为中空结构的基底膜管,萃取时间至1 w时,基底膜仍清晰,但由胶原纤维构成的管状结构排列疏散,不规则,部分有断裂.扫描电镜下观察,随着萃取时间延长,神经内的轴突、髓鞘逐渐减少,萃取时间至96 h时神经内的轴突、髓鞘已被完全去除,可见由胶原纤维构成的立体管状结构,胶原纤维仍维持原有的位置、形态及结构特征,管内并可见膜样结构.萃取时间为1 w时,由胶原纤维构成的立体管状结构与96 h的标本相似,但结构较之稍散乱,形成的管腔不规则.A～F组切片单位面积Lamiain平均灰度分别为:140.1 ±3.41；142.1±3.14；142.1±3.14;140.4 ±4.03;141.7±2.62;142.7±7.24,各组间无显著性差异(P=0.751).结论用Triton X-100化学萃取方法是制备组织工程化神经移植体的有效方法.萃取人类长段粗大神经时,可适当延长萃取时间,不致破坏基底膜的主要成分层黏连蛋白. 目的採用聚氧乙烯辛烷基酚(Triton X-100)去除週圍神經中的雪旺細胞和髓鞘,製取天然神經細胞外基質,構建組織工程化神經移植體.方法健康新西蘭大耳白兔30隻,分彆自梨狀肌下緣水平以遠切取10 mm雙側坐骨神經60根,隨機分為A(12h組)、B(24 h組)、C(48 h組)、D(96 h組)、E(1 w組)用于化學萃取,F(新鮮神經)為對照組.5組神經Triton X-100萃取時間分彆為12 h、24 h、48 h、96 h、1 w.在新鮮神經和萃取後的神經中段分彆切取1段2 mm神經,10％甲醛固定,常規石蠟包埋、縱形切片,行HE染色、燐鎢痠囌木素(PTAH)染色、阿爾辛藍(Alcian blue)染色、層黏連蛋白(Laminin)免疫組化染色.在光鏡下對各組神經進行觀察.結果光鏡下對各組神經進行觀察,新鮮神經可見雪旺細胞分佈均勻,髓鞘、基底膜排列整齊.隨著萃取時間的延長雪旺細胞、髓鞘逐漸減少,髓鞘與基底膜的界限不清,至96 h時神經雪旺細胞、髓鞘消失,縱切片上基底膜呈柵欄樣排列,膜與膜之間為中空結構的基底膜管,萃取時間至1 w時,基底膜仍清晰,但由膠原纖維構成的管狀結構排列疏散,不規則,部分有斷裂.掃描電鏡下觀察,隨著萃取時間延長,神經內的軸突、髓鞘逐漸減少,萃取時間至96 h時神經內的軸突、髓鞘已被完全去除,可見由膠原纖維構成的立體管狀結構,膠原纖維仍維持原有的位置、形態及結構特徵,管內併可見膜樣結構.萃取時間為1 w時,由膠原纖維構成的立體管狀結構與96 h的標本相似,但結構較之稍散亂,形成的管腔不規則.A～F組切片單位麵積Lamiain平均灰度分彆為:140.1 ±3.41；142.1±3.14；142.1±3.14;140.4 ±4.03;141.7±2.62;142.7±7.24,各組間無顯著性差異(P=0.751).結論用Triton X-100化學萃取方法是製備組織工程化神經移植體的有效方法.萃取人類長段粗大神經時,可適噹延長萃取時間,不緻破壞基底膜的主要成分層黏連蛋白.
목적 채용취양을희신완기분(Triton X-100)거제주위신경중적설왕세포화수초,제취천연신경세포외기질,구건조직공정화신경이식체.방법 건강신서란대이백토30지,분별자리상기하연수평이원절취10 mm쌍측좌골신경60근,수궤분위A(12h조)、B(24 h조)、C(48 h조)、D(96 h조)、E(1 w조)용우화학췌취,F(신선신경)위대조조.5조신경Triton X-100췌취시간분별위12 h、24 h、48 h、96 h、1 w.재신선신경화췌취후적신경중단분별절취1단2 mm신경,10％갑철고정,상규석사포매、종형절편,행HE염색、린오산소목소(PTAH)염색、아이신람(Alcian blue)염색、층점련단백(Laminin)면역조화염색.재광경하대각조신경진행관찰.결과 광경하대각조신경진행관찰,신선신경가견설왕세포분포균균,수초、기저막배렬정제.수착췌취시간적연장설왕세포、수초축점감소,수초여기저막적계한불청,지96 h시신경설왕세포、수초소실,종절편상기저막정책란양배렬,막여막지간위중공결구적기저막관,췌취시간지1 w시,기저막잉청석,단유효원섬유구성적관상결구배렬소산,불규칙,부분유단렬.소묘전경하관찰,수착췌취시간연장,신경내적축돌、수초축점감소,췌취시간지96 h시신경내적축돌、수초이피완전거제,가견유효원섬유구성적입체관상결구,효원섬유잉유지원유적위치、형태급결구특정,관내병가견막양결구.췌취시간위1 w시,유효원섬유구성적입체관상결구여96 h적표본상사,단결구교지초산란,형성적관강불규칙.A～F조절편단위면적Lamiain평균회도분별위:140.1 ±3.41；142.1±3.14；142.1±3.14;140.4 ±4.03;141.7±2.62;142.7±7.24,각조간무현저성차이(P=0.751).결론 용Triton X-100화학췌취방법시제비조직공정화신경이식체적유효방법.췌취인류장단조대신경시,가괄당연장췌취시간,불치파배기저막적주요성분층점련단백.