江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
9期
22-25
,共4页
张萍%施磊%郭昌明%江善祥
張萍%施磊%郭昌明%江善祥
장평%시뢰%곽창명%강선상
GFP蛋白%大肠杆菌%表达%优化%蛋白纯化
GFP蛋白%大腸桿菌%錶達%優化%蛋白純化
GFP단백%대장간균%표체%우화%단백순화
为了将绿色荧光蛋白(GFP)引入大肠杆菌中表达并且进行蛋白的纯化,以提高GFP在大肠杆菌中的表达量,用于传统检测方法的改进及目的菌的应用研究.将人工重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),研究大肠杆菌菌株在温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对HIS-GFP融合蛋白表达量的影响.结果:大肠杆菌菌株BL21(DE3)在37℃培养下,D600为0.6～0.8,使用终浓度为0.5 mmol/L的IPTG在15℃诱导培养12 h时,HIS-GFP融合蛋白表达量最高,表达的HIS-GFP融合蛋白可占细菌总蛋白的40％以上.用Ni-IDA亲和层析柱对HIS-GFP融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE分析表明HIS-GFP融合蛋白大小约为68 ku,与预计的分子量大小一致,Western blotting分析表明其能与Anti-HIS单克隆抗体起特异性反应.
為瞭將綠色熒光蛋白(GFP)引入大腸桿菌中錶達併且進行蛋白的純化,以提高GFP在大腸桿菌中的錶達量,用于傳統檢測方法的改進及目的菌的應用研究.將人工重組質粒轉入大腸桿菌BL21(DE3),研究大腸桿菌菌株在溫度、誘導時間以及誘導劑IPTG濃度等不同條件對HIS-GFP融閤蛋白錶達量的影響.結果:大腸桿菌菌株BL21(DE3)在37℃培養下,D600為0.6～0.8,使用終濃度為0.5 mmol/L的IPTG在15℃誘導培養12 h時,HIS-GFP融閤蛋白錶達量最高,錶達的HIS-GFP融閤蛋白可佔細菌總蛋白的40％以上.用Ni-IDA親和層析柱對HIS-GFP融閤蛋白進行純化,SDS-PAGE分析錶明HIS-GFP融閤蛋白大小約為68 ku,與預計的分子量大小一緻,Western blotting分析錶明其能與Anti-HIS單剋隆抗體起特異性反應.
위료장록색형광단백(GFP)인입대장간균중표체병차진행단백적순화,이제고GFP재대장간균중적표체량,용우전통검측방법적개진급목적균적응용연구.장인공중조질립전입대장간균BL21(DE3),연구대장간균균주재온도、유도시간이급유도제IPTG농도등불동조건대HIS-GFP융합단백표체량적영향.결과:대장간균균주BL21(DE3)재37℃배양하,D600위0.6～0.8,사용종농도위0.5 mmol/L적IPTG재15℃유도배양12 h시,HIS-GFP융합단백표체량최고,표체적HIS-GFP융합단백가점세균총단백적40％이상.용Ni-IDA친화층석주대HIS-GFP융합단백진행순화,SDS-PAGE분석표명HIS-GFP융합단백대소약위68 ku,여예계적분자량대소일치,Western blotting분석표명기능여Anti-HIS단극륭항체기특이성반응.
