CAJ | 학술논문

目的:通过短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)干扰精氨酸特异性腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(arginine-specific adenosinediphosphate-ribosyltransferase 1,ART1)基因的表达,研究沉默ART1基因对小鼠结肠癌CT26细胞增殖的影响及可能的机制.方法:细胞免疫荧光法检测ART1水平,以证实CT26细胞中有ART1的表达.用ART1-shRNA和阴性对照shRNA (negative control-shRNA,NC-shRNA)慢病毒感染CT26细胞后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中ART1 mRNA和ART1、RhoA、c-myc及c-fos蛋白的表达；CCK-8(cell counting kit-8)法分析各组细胞增殖情况.结果:CT26细胞中有ART1的表达.ART1-shRNA和NC-shRNA慢病毒成功感染细胞,获得稳定低表达ART1基因的CT26细胞株.与感染NC-shRNA慢病毒和未感染的CT26细胞相比,感染ART1-shRNA慢病毒的CT26细胞中ART1 mRNA表达水平及ART1、RhoA、c-myc和c-fos的蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01),而细胞增殖抑制率明显升高(P＜0.01).结论:干扰ART1表达可抑制CT26细胞增殖,提示ART1在肿瘤生长、增殖过程中发挥重要作用,其机制可能与ART1基因沉默后RhoA及其下游因子c-myc和c-fos的表达被抑制有关.
목적:통과단발협RNA (short hairpin RNA,shRNA)간우정안산특이성선감이린산핵당기화전이매1(arginine-specific adenosinediphosphate-ribosyltransferase 1,ART1)기인적표체,연구침묵ART1기인대소서결장암CT26세포증식적영향급가능적궤제.방법:세포면역형광법검측ART1수평,이증실CT26세포중유ART1적표체.용ART1-shRNA화음성대조shRNA (negative control-shRNA,NC-shRNA)만병독감염CT26세포후,분별채용RT-PCR화단백질인적법검측각조세포중ART1 mRNA화ART1、RhoA、c-myc급c-fos단백적표체；CCK-8(cell counting kit-8)법분석각조세포증식정황.결과:CT26세포중유ART1적표체.ART1-shRNA화NC-shRNA만병독성공감염세포,획득은정저표체ART1기인적CT26세포주.여감염NC-shRNA만병독화미감염적CT26세포상비,감염ART1-shRNA만병독적CT26세포중ART1 mRNA표체수평급ART1、RhoA、c-myc화c-fos적단백표체수평균현저강저(P＜0.01),이세포증식억제솔명현승고(P＜0.01).결론:간우ART1표체가억제CT26세포증식,제시ART1재종류생장、증식과정중발휘중요작용,기궤제가능여ART1기인침묵후RhoA급기하유인자c-myc화c-fos적표체피억제유관.