CAJ | 학술논문

目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)刺激自然杀伤(natural killer,NK)细胞产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的作用机制.方法:采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法,分离得到高纯度的NK细胞；乳酸脱氢酶释放法检测NDV激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用；实时荧光定量-PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测 NDV刺激NK细胞4h后对TRAIL mRNA表达水平的影响；FCM检测NDV刺激NK细胞16 h时TRAIL蛋白的表达情况；ELISA法检测NDV刺激NK细胞后对其分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响；最后采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,再采用FCM检测NDV刺激的NK细胞中TRAIL蛋白的表达情况.结果:FCM检测结果显示,分离得到的NK细胞的纯度达(90.60±1.15)％:NDV刺激NK细胞16h后,明显增强NK细胞的杀伤肿瘤作用,NDV效价为204.8 HU刺激组的杀伤率达到(22.28±0.84)％；RFQ-PCR及FCM检测结果显示,不同效价的NDV刺激NK细胞后,NK细胞中TRAIL mRNA及蛋白表达水平均明显升高；ELISA检测结果显示,NDV刺激NK细胞后IFN-γ的分泌水平明显增加,在NDV效价为25.6HU刺激16 h时达到峰值(796.47±37.87) pg/mL;采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,NK细胞中TRAIL蛋白表达水平明显下降.结论:NDV刺激NK细胞后可增强IFN-γ的分泌水平,进而通过IFN-γ上调TRAIL的表达,此途径为NDV刺激NK细胞表达TRAIL的机制之一.此外,NDV直接刺激NK细胞表达TRAIL是另一条重要的途径.
목적:연구신성역병독(Newcastle disease virus,NDV)자격자연살상(natural killer,NK)세포산생종류배사인자상관조망유도배체(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)적작용궤제.방법:채용면역자주분선(magnetic activated cell sorting,MACS)법,분리득도고순도적NK세포；유산탈경매석방법검측NDV격활적NK세포대인간암HepG2세포적살상작용；실시형광정량-PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)검측 NDV자격NK세포4h후대TRAIL mRNA표체수평적영향；FCM검측NDV자격NK세포16 h시TRAIL단백적표체정황；ELISA법검측NDV자격NK세포후대기분비간우소γ(interferon-γ,IFN-γ)적영향；최후채용항IFN-γ항체중화IFN-γ후,재채용FCM검측NDV자격적NK세포중TRAIL단백적표체정황.결과:FCM검측결과현시,분리득도적NK세포적순도체(90.60±1.15)％:NDV자격NK세포16h후,명현증강NK세포적살상종류작용,NDV효개위204.8 HU자격조적살상솔체도(22.28±0.84)％；RFQ-PCR급FCM검측결과현시,불동효개적NDV자격NK세포후,NK세포중TRAIL mRNA급단백표체수평균명현승고；ELISA검측결과현시,NDV자격NK세포후IFN-γ적분비수평명현증가,재NDV효개위25.6HU자격16 h시체도봉치(796.47±37.87) pg/mL;채용항IFN-γ항체중화IFN-γ후,NK세포중TRAIL단백표체수평명현하강.결론:NDV자격NK세포후가증강IFN-γ적분비수평,진이통과IFN-γ상조TRAIL적표체,차도경위NDV자격NK세포표체TRAIL적궤제지일.차외,NDV직접자격NK세포표체TRAIL시령일조중요적도경.