华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2012年
6期
697-703
,共7页
王利群%顾雅平%曹利民%汪庆%于海燕%奚学志%孙培培%沈关心
王利群%顧雅平%曹利民%汪慶%于海燕%奚學誌%孫培培%瀋關心
왕리군%고아평%조이민%왕경%우해연%해학지%손배배%침관심
胱硫醚β-合成酶%重组%可溶性蛋白%表达
胱硫醚β-閤成酶%重組%可溶性蛋白%錶達
광류미β-합성매%중조%가용성단백%표체
目的 构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础.方法 通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21.使用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的 蛋白活性.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44 mg/L,比活约1 100 U/mg.15%SDS-PAGE 显示其相对分子质量为45 kD,与预计大小一致.表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色.结论 成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂盒的开发有一定的潜在应用价值.
目的 構建截短人胱硫醚β-閤成酶(T-hCBS)基因原覈錶達載體,得到可溶性的T-hCBS蛋白,為同型半胱氨痠檢測試劑盒的開髮打下基礎.方法 通過優化T-hCBS基因,剋隆併構建重組錶達質粒pET15b/T-hCBS,轉化大腸埃希菌BL21.使用Ni2+親和層析柱對重組蛋白進行純化,再通過HiTrap脫鹽柱脫鹽,採用比色法檢測目的 蛋白活性.結果 重組蛋白在大腸埃希菌中可以高效錶達,產量為44 mg/L,比活約1 100 U/mg.15%SDS-PAGE 顯示其相對分子質量為45 kD,與預計大小一緻.錶達菌體超聲破碎後上清及純化的蛋白溶液均呈現紅色.結論 成功剋隆和錶達瞭T-hCBS蛋白,併得到高產高酶活性的可溶性蛋白,對同型半胱氨痠檢測試劑盒的開髮有一定的潛在應用價值.
목적 구건절단인광류미β-합성매(T-hCBS)기인원핵표체재체,득도가용성적T-hCBS단백,위동형반광안산검측시제합적개발타하기출.방법 통과우화T-hCBS기인,극륭병구건중조표체질립pET15b/T-hCBS,전화대장애희균BL21.사용Ni2+친화층석주대중조단백진행순화,재통과HiTrap탈염주탈염,채용비색법검측목적 단백활성.결과 중조단백재대장애희균중가이고효표체,산량위44 mg/L,비활약1 100 U/mg.15%SDS-PAGE 현시기상대분자질량위45 kD,여예계대소일치.표체균체초성파쇄후상청급순화적단백용액균정현홍색.결론 성공극륭화표체료T-hCBS단백,병득도고산고매활성적가용성단백,대동형반광안산검측시제합적개발유일정적잠재응용개치.
