华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2012年
6期
680-683,703
,共5页
鼠角膜缘干细胞%鼠胚胎成纤维细胞%纤维蛋白%3D共培养%细胞存活%细胞分化表型
鼠角膜緣榦細胞%鼠胚胎成纖維細胞%纖維蛋白%3D共培養%細胞存活%細胞分化錶型
서각막연간세포%서배태성섬유세포%섬유단백%3D공배양%세포존활%세포분화표형
目的 探讨纤维蛋白凝胶、鼠胚胎成纤维细胞与鼠角膜缘干细胞的3D共培养模型是否有助于角膜缘干细胞的生存率提高和细胞表型的维持.方法 细胞采用96孔圆底培养板培养,并分为3组:①鼠角膜缘干细胞单独培养组(A组),含3×104个角膜缘干细胞;(2)鼠角膜缘干细胞与纤维蛋白共培养组(B组),将纤维蛋白原配成10 mg/mL的磷酸盐溶液,与鼠角膜缘干细胞混合成3×105/mL的混合悬液,取100 μL 细胞悬液培养;③鼠角膜缘干细胞、纤维蛋白和鼠胚胎成纤维细胞共培养组(C组),将鼠角膜缘干细胞与鼠胚胎成纤维细胞以1:0.5混合,配成含有10 mg/mL纤维蛋白原的4.5×105/mL混合悬液,取100 μL 进行培养.于培养后4、24和48 h,以Annexin Ⅴ染色,采用流式细胞仪检测其细胞生存率和凋亡率.以Western blot检测角膜缘干细胞分化蛋白Keratin K3/K76的表达.结果 角膜缘干细胞在4、24 和48 h的生存率最高者为C组,分别是(95.7±2.0)%、(95.1±1.2)% 和(92.0±1.7)%;其次为B组,分别是(95.2±3.0)%、(89.8±1.5)% 和(80.0±0.8)%;最低为A组,分别是(95.0±1.2)%,(84.5±1.2)% 和(70.0±0.9)%.细胞凋亡率的趋势与此相反.角膜干细胞分化蛋白的表达强度,在4 h时各组之间的表达强度无统计学差异,但在48 h时,C组的表达强度(70±4)明显低于B组(97±6)和A组(102±4).结论 鼠角膜缘干细胞与纤维蛋白和鼠胚胎成纤维细胞的共同培养模式有助于提高角膜缘干细胞在3D培养中的存活率,可减少鼠角膜缘干细胞的分化和有益于其表型的维持.
目的 探討纖維蛋白凝膠、鼠胚胎成纖維細胞與鼠角膜緣榦細胞的3D共培養模型是否有助于角膜緣榦細胞的生存率提高和細胞錶型的維持.方法 細胞採用96孔圓底培養闆培養,併分為3組:①鼠角膜緣榦細胞單獨培養組(A組),含3×104箇角膜緣榦細胞;(2)鼠角膜緣榦細胞與纖維蛋白共培養組(B組),將纖維蛋白原配成10 mg/mL的燐痠鹽溶液,與鼠角膜緣榦細胞混閤成3×105/mL的混閤懸液,取100 μL 細胞懸液培養;③鼠角膜緣榦細胞、纖維蛋白和鼠胚胎成纖維細胞共培養組(C組),將鼠角膜緣榦細胞與鼠胚胎成纖維細胞以1:0.5混閤,配成含有10 mg/mL纖維蛋白原的4.5×105/mL混閤懸液,取100 μL 進行培養.于培養後4、24和48 h,以Annexin Ⅴ染色,採用流式細胞儀檢測其細胞生存率和凋亡率.以Western blot檢測角膜緣榦細胞分化蛋白Keratin K3/K76的錶達.結果 角膜緣榦細胞在4、24 和48 h的生存率最高者為C組,分彆是(95.7±2.0)%、(95.1±1.2)% 和(92.0±1.7)%;其次為B組,分彆是(95.2±3.0)%、(89.8±1.5)% 和(80.0±0.8)%;最低為A組,分彆是(95.0±1.2)%,(84.5±1.2)% 和(70.0±0.9)%.細胞凋亡率的趨勢與此相反.角膜榦細胞分化蛋白的錶達彊度,在4 h時各組之間的錶達彊度無統計學差異,但在48 h時,C組的錶達彊度(70±4)明顯低于B組(97±6)和A組(102±4).結論 鼠角膜緣榦細胞與纖維蛋白和鼠胚胎成纖維細胞的共同培養模式有助于提高角膜緣榦細胞在3D培養中的存活率,可減少鼠角膜緣榦細胞的分化和有益于其錶型的維持.
목적 탐토섬유단백응효、서배태성섬유세포여서각막연간세포적3D공배양모형시부유조우각막연간세포적생존솔제고화세포표형적유지.방법 세포채용96공원저배양판배양,병분위3조:①서각막연간세포단독배양조(A조),함3×104개각막연간세포;(2)서각막연간세포여섬유단백공배양조(B조),장섬유단백원배성10 mg/mL적린산염용액,여서각막연간세포혼합성3×105/mL적혼합현액,취100 μL 세포현액배양;③서각막연간세포、섬유단백화서배태성섬유세포공배양조(C조),장서각막연간세포여서배태성섬유세포이1:0.5혼합,배성함유10 mg/mL섬유단백원적4.5×105/mL혼합현액,취100 μL 진행배양.우배양후4、24화48 h,이Annexin Ⅴ염색,채용류식세포의검측기세포생존솔화조망솔.이Western blot검측각막연간세포분화단백Keratin K3/K76적표체.결과 각막연간세포재4、24 화48 h적생존솔최고자위C조,분별시(95.7±2.0)%、(95.1±1.2)% 화(92.0±1.7)%;기차위B조,분별시(95.2±3.0)%、(89.8±1.5)% 화(80.0±0.8)%;최저위A조,분별시(95.0±1.2)%,(84.5±1.2)% 화(70.0±0.9)%.세포조망솔적추세여차상반.각막간세포분화단백적표체강도,재4 h시각조지간적표체강도무통계학차이,단재48 h시,C조적표체강도(70±4)명현저우B조(97±6)화A조(102±4).결론 서각막연간세포여섬유단백화서배태성섬유세포적공동배양모식유조우제고각막연간세포재3D배양중적존활솔,가감소서각막연간세포적분화화유익우기표형적유지.
