华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2012年
6期
660-664
,共5页
胡嘏%陈忠%吴嘉%张勇%徐华%杨为民%叶章群
鬍嘏%陳忠%吳嘉%張勇%徐華%楊為民%葉章群
호하%진충%오가%장용%서화%양위민%협장군
RNA激活%小激活RNA,dsP21-322%p21%p53%人类细胞
RNA激活%小激活RNA,dsP21-322%p21%p53%人類細胞
RNA격활%소격활RNA,dsP21-322%p21%p53%인류세포
目的 筛选更多的对小分子双链RNA(dsP21-322)介导抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效应的人类细胞系,并初步研究该过程是否依赖p53的表达.方法 选择4种表达不同类型p53蛋白的人类细胞系,p53野生型(p53 wild type)的人骨肉瘤细胞系U2-OS、人肾上皮细胞系293T,p53突变型(p53 mutant type)的人宫颈癌细胞系HeLa及p53缺失(p53 null)的人肺腺癌细胞系NCI-H1299,转染dsControl(阴性对照)或dsP21-322至以上细胞,RT-qPCR和Western blot分别检测p21、p53 mRNA和蛋白表达的变化.结果 dsP21-322的转染未明显影响上述细胞系p53的表达;而在U2-OS、HeLa和293T细胞系中均能激活p21的表达,相比dsControl,分别上调p21 mRNA的表达3.97倍、4.94倍和4.64倍,Western blot进一步证明在这3种细胞系中p21蛋白表达水平的增加与p21 mRNA水平的上调相一致,且与dsControl组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).但是在p53缺失的NCI-H1299细胞系中,dsP21-322则不能上调p21的表达.结论 dsP21-322介导p21激活现象存在于人类细胞,而其未能上调p53缺失细胞系中p21的表达是否提示该过程可能依赖p53的表达尚有待进一步研究.
目的 篩選更多的對小分子雙鏈RNA(dsP21-322)介導抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效應的人類細胞繫,併初步研究該過程是否依賴p53的錶達.方法 選擇4種錶達不同類型p53蛋白的人類細胞繫,p53野生型(p53 wild type)的人骨肉瘤細胞繫U2-OS、人腎上皮細胞繫293T,p53突變型(p53 mutant type)的人宮頸癌細胞繫HeLa及p53缺失(p53 null)的人肺腺癌細胞繫NCI-H1299,轉染dsControl(陰性對照)或dsP21-322至以上細胞,RT-qPCR和Western blot分彆檢測p21、p53 mRNA和蛋白錶達的變化.結果 dsP21-322的轉染未明顯影響上述細胞繫p53的錶達;而在U2-OS、HeLa和293T細胞繫中均能激活p21的錶達,相比dsControl,分彆上調p21 mRNA的錶達3.97倍、4.94倍和4.64倍,Western blot進一步證明在這3種細胞繫中p21蛋白錶達水平的增加與p21 mRNA水平的上調相一緻,且與dsControl組相比,差異均有統計學意義(均P<0.05).但是在p53缺失的NCI-H1299細胞繫中,dsP21-322則不能上調p21的錶達.結論 dsP21-322介導p21激活現象存在于人類細胞,而其未能上調p53缺失細胞繫中p21的錶達是否提示該過程可能依賴p53的錶達尚有待進一步研究.
목적 사선경다적대소분자쌍련RNA(dsP21-322)개도억암기인p21WAF1/CIP1격활기효응적인류세포계,병초보연구해과정시부의뢰p53적표체.방법 선택4충표체불동류형p53단백적인류세포계,p53야생형(p53 wild type)적인골육류세포계U2-OS、인신상피세포계293T,p53돌변형(p53 mutant type)적인궁경암세포계HeLa급p53결실(p53 null)적인폐선암세포계NCI-H1299,전염dsControl(음성대조)혹dsP21-322지이상세포,RT-qPCR화Western blot분별검측p21、p53 mRNA화단백표체적변화.결과 dsP21-322적전염미명현영향상술세포계p53적표체;이재U2-OS、HeLa화293T세포계중균능격활p21적표체,상비dsControl,분별상조p21 mRNA적표체3.97배、4.94배화4.64배,Western blot진일보증명재저3충세포계중p21단백표체수평적증가여p21 mRNA수평적상조상일치,차여dsControl조상비,차이균유통계학의의(균P<0.05).단시재p53결실적NCI-H1299세포계중,dsP21-322칙불능상조p21적표체.결론 dsP21-322개도p21격활현상존재우인류세포,이기미능상조p53결실세포계중p21적표체시부제시해과정가능의뢰p53적표체상유대진일보연구.
