中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2012年
11期
1014-1018,1031
,共6页
EV71%Bac-to-Bac表达系统%病毒样颗粒
EV71%Bac-to-Bac錶達繫統%病毒樣顆粒
EV71%Bac-to-Bac표체계통%병독양과립
目的:研究新肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的制备方法.方法:依据昆虫细胞偏爱密码子优化EV71 P1和EV71 3CD基因,将二者分别克隆至供体质粒pFastBac Dual多角体蛋白启动子pPh和pP10上;构建重组pFastBac Dual EV71 P1-3CD质粒,并与Bacmid质粒转座后,获得重组杆状病毒表达质粒转染至Sf9细胞,应用PCR、免疫荧光、SDS-Page和Western blot方法鉴定EV71 VLPs表达情况,最后利用蔗糖密度梯度离心的方法纯化EV71 VLPs.结果:经昆虫密码子优化的EV71 P1和EV71 3CD基因,利用Bac-to-Bac系统成功组装了EV71 VLPs,纯化EV71 VLPs的浓度为0.817 mg/ml,纯度>90%.结论:成功地构建了重组杆状病毒EV71 P1-3CD Bacmid表达质粒,并表达和纯化了 EV71 VLPs,这为今后EV71 VLPs疫苗的研究奠定了基础.
目的:研究新腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)病毒樣顆粒(Virus-like particles,VLPs)的製備方法.方法:依據昆蟲細胞偏愛密碼子優化EV71 P1和EV71 3CD基因,將二者分彆剋隆至供體質粒pFastBac Dual多角體蛋白啟動子pPh和pP10上;構建重組pFastBac Dual EV71 P1-3CD質粒,併與Bacmid質粒轉座後,穫得重組桿狀病毒錶達質粒轉染至Sf9細胞,應用PCR、免疫熒光、SDS-Page和Western blot方法鑒定EV71 VLPs錶達情況,最後利用蔗糖密度梯度離心的方法純化EV71 VLPs.結果:經昆蟲密碼子優化的EV71 P1和EV71 3CD基因,利用Bac-to-Bac繫統成功組裝瞭EV71 VLPs,純化EV71 VLPs的濃度為0.817 mg/ml,純度>90%.結論:成功地構建瞭重組桿狀病毒EV71 P1-3CD Bacmid錶達質粒,併錶達和純化瞭 EV71 VLPs,這為今後EV71 VLPs疫苗的研究奠定瞭基礎.
목적:연구신장도병독71형(Enterovirus 71,EV71)병독양과립(Virus-like particles,VLPs)적제비방법.방법:의거곤충세포편애밀마자우화EV71 P1화EV71 3CD기인,장이자분별극륭지공체질립pFastBac Dual다각체단백계동자pPh화pP10상;구건중조pFastBac Dual EV71 P1-3CD질립,병여Bacmid질립전좌후,획득중조간상병독표체질립전염지Sf9세포,응용PCR、면역형광、SDS-Page화Western blot방법감정EV71 VLPs표체정황,최후이용자당밀도제도리심적방법순화EV71 VLPs.결과:경곤충밀마자우화적EV71 P1화EV71 3CD기인,이용Bac-to-Bac계통성공조장료EV71 VLPs,순화EV71 VLPs적농도위0.817 mg/ml,순도>90%.결론:성공지구건료중조간상병독EV71 P1-3CD Bacmid표체질립,병표체화순화료 EV71 VLPs,저위금후EV71 VLPs역묘적연구전정료기출.
