复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2012年
6期
558-564
,共7页
刘红%俞小芳%滕杰%邹建洲%方艺%刘少鹏%丁小强
劉紅%俞小芳%滕傑%鄒建洲%方藝%劉少鵬%丁小彊
류홍%유소방%등걸%추건주%방예%류소붕%정소강
骨髓间充质干细胞(BMSCs)%低氧%增殖%凋亡
骨髓間充質榦細胞(BMSCs)%低氧%增殖%凋亡
골수간충질간세포(BMSCs)%저양%증식%조망
目的 探讨低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、凋亡和坏死的影响及其可能机制.方法 采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSCs,通过细胞成脂、成骨分化诱导及流式细胞仪检测其表面标志物(CD29、CD90、CD45)鉴定BMSCs；运用siRNA干扰技术沉默低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)基因.将细胞分成6组:正常培养组、正常培养+转染阴性对照组、正常培养+HIF-1α RNA干扰组、低氧预处理组、低氧培养+转染阴性对照组及低氧培养+HIF-1aRNA干扰组,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪和乳酸脱氢酶(lactic acid dehydrogenase,LDH)活力测定等方法,检测各组BMSCs的增殖、凋亡和坏死情况；Western blot和real-time PCR检测各组BMSCs中HIF-1α、葡萄糖转运子-1(glucose transporter,GLUT-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA和蛋白的表达.结果 培养的BMSCs具有成脂、成骨等多向分化潜能；流式检测呈现CD29和CD90高表达,CD45低表达；低氧预处理可促进BMSCs增殖,减轻坏死,对细胞凋亡无明显影响；低氧预处理组HIF-1α、GLUT-1及VEGF的蛋白及mRNA表达明显高于常氧培养组(P＜0.05)；给予低氧预处理组siRNA HIF-1α后其HIF-1α、GLUT-1及VEGF的蛋白及mRNA表达均明显低于未干扰前(P＜0.05),且细胞增殖受抑制,细胞凋亡和坏死加重(与未干扰前相比,P＜0.05).结论 低氧预处理可促进BMSCs的体外增殖,减轻坏死,其机制可能与低氧预处理后HIF-1α表达增加及上调其下游基因GLUT-1和VEGF表达有关.
目的 探討低氧預處理對大鼠骨髓間充質榦細胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、凋亡和壞死的影響及其可能機製.方法 採用全骨髓細胞貼壁法分離培養BMSCs,通過細胞成脂、成骨分化誘導及流式細胞儀檢測其錶麵標誌物(CD29、CD90、CD45)鑒定BMSCs；運用siRNA榦擾技術沉默低氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)基因.將細胞分成6組:正常培養組、正常培養+轉染陰性對照組、正常培養+HIF-1α RNA榦擾組、低氧預處理組、低氧培養+轉染陰性對照組及低氧培養+HIF-1aRNA榦擾組,分彆採用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法、流式細胞儀和乳痠脫氫酶(lactic acid dehydrogenase,LDH)活力測定等方法,檢測各組BMSCs的增殖、凋亡和壞死情況；Western blot和real-time PCR檢測各組BMSCs中HIF-1α、葡萄糖轉運子-1(glucose transporter,GLUT-1)及血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA和蛋白的錶達.結果 培養的BMSCs具有成脂、成骨等多嚮分化潛能；流式檢測呈現CD29和CD90高錶達,CD45低錶達；低氧預處理可促進BMSCs增殖,減輕壞死,對細胞凋亡無明顯影響；低氧預處理組HIF-1α、GLUT-1及VEGF的蛋白及mRNA錶達明顯高于常氧培養組(P＜0.05)；給予低氧預處理組siRNA HIF-1α後其HIF-1α、GLUT-1及VEGF的蛋白及mRNA錶達均明顯低于未榦擾前(P＜0.05),且細胞增殖受抑製,細胞凋亡和壞死加重(與未榦擾前相比,P＜0.05).結論 低氧預處理可促進BMSCs的體外增殖,減輕壞死,其機製可能與低氧預處理後HIF-1α錶達增加及上調其下遊基因GLUT-1和VEGF錶達有關.
목적 탐토저양예처리대대서골수간충질간세포(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)증식、조망화배사적영향급기가능궤제.방법 채용전골수세포첩벽법분리배양BMSCs,통과세포성지、성골분화유도급류식세포의검측기표면표지물(CD29、CD90、CD45)감정BMSCs；운용siRNA간우기술침묵저양유도인자-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)기인.장세포분성6조:정상배양조、정상배양+전염음성대조조、정상배양+HIF-1α RNA간우조、저양예처리조、저양배양+전염음성대조조급저양배양+HIF-1aRNA간우조,분별채용사갑기우담서염(MTT)법、류식세포의화유산탈경매(lactic acid dehydrogenase,LDH)활력측정등방법,검측각조BMSCs적증식、조망화배사정황；Western blot화real-time PCR검측각조BMSCs중HIF-1α、포도당전운자-1(glucose transporter,GLUT-1)급혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)적mRNA화단백적표체.결과 배양적BMSCs구유성지、성골등다향분화잠능；류식검측정현CD29화CD90고표체,CD45저표체；저양예처리가촉진BMSCs증식,감경배사,대세포조망무명현영향；저양예처리조HIF-1α、GLUT-1급VEGF적단백급mRNA표체명현고우상양배양조(P＜0.05)；급여저양예처리조siRNA HIF-1α후기HIF-1α、GLUT-1급VEGF적단백급mRNA표체균명현저우미간우전(P＜0.05),차세포증식수억제,세포조망화배사가중(여미간우전상비,P＜0.05).결론 저양예처리가촉진BMSCs적체외증식,감경배사,기궤제가능여저양예처리후HIF-1α표체증가급상조기하유기인GLUT-1화VEGF표체유관.
