长治医学院学报
長治醫學院學報
장치의학원학보
JOURNAL OF CHANGZHI MEDICAL COLLEGE
2012年
6期
404-406
,共3页
小鼠PRL-3%原核表达载体%融合蛋白
小鼠PRL-3%原覈錶達載體%融閤蛋白
소서PRL-3%원핵표체재체%융합단백
目的:构建小鼠PRL-3基因的原核表达载体,并在感受态细菌BL21中表达.方法:提取小鼠黑色素瘤B16F10细胞的总RNA,经RT-PCR扩增小鼠PRL-3基因,并将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,阳性克隆经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶解及测序鉴定后,转化感受态细菌BL21,经IPTG诱导表达GST-mPRL-3融合蛋白.结果:获得全长为522 bp的小鼠PRL-3基因片段,构建重组质粒pGEX 4T-1 mPRL-3,转化感受态细菌BL21后,经IPTG诱导,表达出分子质量约为46KD的GST-mPRL-3蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以可溶性形式存在于E.coli BL21的胞质中.结论:成功地构建了原核表达载体pGEX-4T-1-mPRL-3,为抗体的制备筛选和肿瘤的相关研究奠定了实验基础.
目的:構建小鼠PRL-3基因的原覈錶達載體,併在感受態細菌BL21中錶達.方法:提取小鼠黑色素瘤B16F10細胞的總RNA,經RT-PCR擴增小鼠PRL-3基因,併將其剋隆入原覈錶達載體pGEX-4T-1中,暘性剋隆經限製性內切酶BamHI、EcoRI酶解及測序鑒定後,轉化感受態細菌BL21,經IPTG誘導錶達GST-mPRL-3融閤蛋白.結果:穫得全長為522 bp的小鼠PRL-3基因片段,構建重組質粒pGEX 4T-1 mPRL-3,轉化感受態細菌BL21後,經IPTG誘導,錶達齣分子質量約為46KD的GST-mPRL-3蛋白.SDS-PAGE分析顯示,錶達的蛋白主要以可溶性形式存在于E.coli BL21的胞質中.結論:成功地構建瞭原覈錶達載體pGEX-4T-1-mPRL-3,為抗體的製備篩選和腫瘤的相關研究奠定瞭實驗基礎.
목적:구건소서PRL-3기인적원핵표체재체,병재감수태세균BL21중표체.방법:제취소서흑색소류B16F10세포적총RNA,경RT-PCR확증소서PRL-3기인,병장기극륭입원핵표체재체pGEX-4T-1중,양성극륭경한제성내절매BamHI、EcoRI매해급측서감정후,전화감수태세균BL21,경IPTG유도표체GST-mPRL-3융합단백.결과:획득전장위522 bp적소서PRL-3기인편단,구건중조질립pGEX 4T-1 mPRL-3,전화감수태세균BL21후,경IPTG유도,표체출분자질량약위46KD적GST-mPRL-3단백.SDS-PAGE분석현시,표체적단백주요이가용성형식존재우E.coli BL21적포질중.결론:성공지구건료원핵표체재체pGEX-4T-1-mPRL-3,위항체적제비사선화종류적상관연구전정료실험기출.
