CAJ | 학술논문

目的优化细菌内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO实验模型的条件.方法采用Hank's液灌洗小鼠腹腔,收集腹腔留居巨噬细胞,利用铜绿假单胞菌脂多糖(LPS)作为内毒素刺激巨噬细胞产生NO,以Griess法检测培养上清液中NO的浓度,考察细胞浓度、LPS浓度、LPS刺激时长、培养液体积等因素对巨噬细胞产生NO的影响,优化实验条件,并用已知药物验证模型的可靠性.结果本实验条件下,细胞浓度对NO的产生具有关键性影响,最适浓度为6×106个细胞/ml,96孔板中每孔 100 μl;LPS浓度＜1 μg/ml时,NO的产生随LPS浓度的增加而增加(P＜0.001),LPS浓度＞1 μg/ml时,NO的增加的幅度明显下降,当LPS浓度为10 μg/ml时,NO产生达到峰值；NO的产生随LPS刺激时间的延长,其含量相应增加,24与48 h之间的增加幅度大于48 h与72 h之间的增加幅度(P＜0.05)；培养上清中NO的含量与培养液的体积有一定关系,100 μl时的NO含量最高.阿司匹林(1 mmol/L)、地塞米松(10 μmol/L)、环孢霉素A(10 μmol/L)均能明显抑制LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO(P＜0.001).结论巨噬细胞浓度、LPS浓度、LPS刺激时长是建立内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮实验模型的主要影响因素.推荐方案为:巨噬细胞浓度5×106个细胞/ml,100μl/孔；LPS浓度10 μg/ml；LPS刺激时长24 h或48 h;培养液体积100～200 μl.
목적 우화세균내독소자격소서복강거서세포산생NO실험모형적조건.방법 채용Hank's액관세소서복강,수집복강류거거서세포,이용동록가단포균지다당(LPS)작위내독소자격거서세포산생NO,이Griess법검측배양상청액중NO적농도,고찰세포농도、LPS농도、LPS자격시장、배양액체적등인소대거서세포산생NO적영향,우화실험조건,병용이지약물험증모형적가고성.결과 본실험조건하,세포농도대NO적산생구유관건성영향,최괄농도위6×106개세포/ml,96공판중매공 100 μl;LPS농도＜1 μg/ml시,NO적산생수LPS농도적증가이증가(P＜0.001),LPS농도＞1 μg/ml시,NO적증가적폭도명현하강,당LPS농도위10 μg/ml시,NO산생체도봉치；NO적산생수LPS자격시간적연장,기함량상응증가,24여48 h지간적증가폭도대우48 h여72 h지간적증가폭도(P＜0.05)；배양상청중NO적함량여배양액적체적유일정관계,100 μl시적NO함량최고.아사필림(1 mmol/L)、지새미송(10 μmol/L)、배포매소A(10 μmol/L)균능명현억제LPS자격소서복강거서세포산생NO(P＜0.001).결론 거서세포농도、LPS농도、LPS자격시장시건립내독소자격소서복강거서세포분비일양화담실험모형적주요영향인소.추천방안위:거서세포농도5×106개세포/ml,100μl/공；LPS농도10 μg/ml；LPS자격시장24 h혹48 h;배양액체적100～200 μl.