南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
11期
1536-1542
,共7页
王盛%董洁%曹慜%穆红珍%丁国平%张虹
王盛%董潔%曹慜%穆紅珍%丁國平%張虹
왕성%동길%조민%목홍진%정국평%장홍
RNA沉默抑制子%马铃薯X病毒%共表达%绿色荧光蛋白
RNA沉默抑製子%馬鈴藷X病毒%共錶達%綠色熒光蛋白
RNA침묵억제자%마령서X병독%공표체%록색형광단백
目的 探索不同植物病毒RNA沉默抑制子对植物病毒载体表达系统重组蛋白表达水平的作用,为合理高效地利用这一新型的外源基因表达平台奠定基础.方法 构建了7种不同的RNA沉默抑制子瞬时表达载体,以农杆菌渗滤法,与马铃薯X病毒表达载体PVXdt-GFP共侵染寄主植物本明烟,通过对报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的荧光观察,并以Western blotting、ELISA 和RT-qPCR等测定GFP在烟草中的表达情况,分析不同RNA沉默抑制子对植物中外源基因表达水平的作用和特点.结果 7种病毒RNA沉默抑制子对外源基因GFP在烟草中表达水平的作用效果和持续时间存在差异,其中,番茄丛矮病毒的P19蛋白的增效作用最好,作用时间也最长；非洲木薯花叶病毒的AC2蛋白和水稻黄斑驳病毒的P1蛋白无明显的增效作用.结论 RNA沉默抑制子可以通过抑制病毒诱导的RNA沉默来提高外源基因在植物中的表达水平和表达持续时间,但是不同的植物病毒载体表达系统需要通过筛选获得其最佳的共表达沉默抑制子“伴侣”.
目的 探索不同植物病毒RNA沉默抑製子對植物病毒載體錶達繫統重組蛋白錶達水平的作用,為閤理高效地利用這一新型的外源基因錶達平檯奠定基礎.方法 構建瞭7種不同的RNA沉默抑製子瞬時錶達載體,以農桿菌滲濾法,與馬鈴藷X病毒錶達載體PVXdt-GFP共侵染寄主植物本明煙,通過對報告基因綠色熒光蛋白(GFP)的熒光觀察,併以Western blotting、ELISA 和RT-qPCR等測定GFP在煙草中的錶達情況,分析不同RNA沉默抑製子對植物中外源基因錶達水平的作用和特點.結果 7種病毒RNA沉默抑製子對外源基因GFP在煙草中錶達水平的作用效果和持續時間存在差異,其中,番茄叢矮病毒的P19蛋白的增效作用最好,作用時間也最長；非洲木藷花葉病毒的AC2蛋白和水稻黃斑駁病毒的P1蛋白無明顯的增效作用.結論 RNA沉默抑製子可以通過抑製病毒誘導的RNA沉默來提高外源基因在植物中的錶達水平和錶達持續時間,但是不同的植物病毒載體錶達繫統需要通過篩選穫得其最佳的共錶達沉默抑製子“伴侶”.
목적 탐색불동식물병독RNA침묵억제자대식물병독재체표체계통중조단백표체수평적작용,위합리고효지이용저일신형적외원기인표체평태전정기출.방법 구건료7충불동적RNA침묵억제자순시표체재체,이농간균삼려법,여마령서X병독표체재체PVXdt-GFP공침염기주식물본명연,통과대보고기인록색형광단백(GFP)적형광관찰,병이Western blotting、ELISA 화RT-qPCR등측정GFP재연초중적표체정황,분석불동RNA침묵억제자대식물중외원기인표체수평적작용화특점.결과 7충병독RNA침묵억제자대외원기인GFP재연초중표체수평적작용효과화지속시간존재차이,기중,번가총왜병독적P19단백적증효작용최호,작용시간야최장；비주목서화협병독적AC2단백화수도황반박병독적P1단백무명현적증효작용.결론 RNA침묵억제자가이통과억제병독유도적RNA침묵래제고외원기인재식물중적표체수평화표체지속시간,단시불동적식물병독재체표체계통수요통과사선획득기최가적공표체침묵억제자“반려”.
