动物营养学报
動物營養學報
동물영양학보
ACTA ZOONUTRIMENTA SINICA
2012年
11期
2165-2171
,共7页
能昌爱%李秀锦%仲飞%李振%张峰%陈慧慧%张考%韩冬梅
能昌愛%李秀錦%仲飛%李振%張峰%陳慧慧%張攷%韓鼕梅
능창애%리수금%중비%리진%장봉%진혜혜%장고%한동매
卵清蛋白%人CD14信号肽%重组蛋白表达%HEK293T细胞
卵清蛋白%人CD14信號肽%重組蛋白錶達%HEK293T細胞
란청단백%인CD14신호태%중조단백표체%HEK293T세포
本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达.提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5′端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA.经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹(Western blot)法检测OVA表达水平.结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列(登录号NM_205152)一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确.经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高.结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件.
本試驗將人CD14信號肽序列與卵清蛋白(ovalbumin,OVA)基因融閤,旨在提高OVA在非輸卵管上皮細胞中的錶達.提取鷄輸卵管上皮細胞總RNA,經反轉錄閤成的cDNA,再利用脩飾的特異性引物,通過PCR從cDNA中分彆擴增齣5′耑與人CD14信號肽序列融閤和非融閤的OVA基因,併將它們分彆插入到真覈錶達載體pcDNA3.1A中,構建成錶達載體pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA.經燐痠鈣介導,將質粒轉染至HEK293T細胞,使其進行錶達,用鼠抗OVA單剋隆抗體通過免疫印跡(Western blot)法檢測OVA錶達水平.結果錶明:本試驗擴增的OVA基因序列與GenBank中的序列(登錄號NM_205152)一緻,構建的人CD14信號肽序列融閤OVA基因的錶達載體結構正確.經過在HEK293T細胞的錶達,融閤人CD14信號肽序列的重組蛋白OVA的錶達水平明顯得到提高.結果提示,融閤人CD14信號肽序列後的重組蛋白OVA在非輸卵管上皮細胞中的錶達水平明顯提高,為OVA基因作為DNA疫苗模式抗原的應用提供瞭必要的條件.
본시험장인CD14신호태서렬여란청단백(ovalbumin,OVA)기인융합,지재제고OVA재비수란관상피세포중적표체.제취계수란관상피세포총RNA,경반전록합성적cDNA,재이용수식적특이성인물,통과PCR종cDNA중분별확증출5′단여인CD14신호태서렬융합화비융합적OVA기인,병장타문분별삽입도진핵표체재체pcDNA3.1A중,구건성표체재체pcDNA-CD14sp-OVA화pcDNA-OVA.경린산개개도,장질립전염지HEK293T세포,사기진행표체,용서항OVA단극륭항체통과면역인적(Western blot)법검측OVA표체수평.결과표명:본시험확증적OVA기인서렬여GenBank중적서렬(등록호NM_205152)일치,구건적인CD14신호태서렬융합OVA기인적표체재체결구정학.경과재HEK293T세포적표체,융합인CD14신호태서렬적중조단백OVA적표체수평명현득도제고.결과제시,융합인CD14신호태서렬후적중조단백OVA재비수란관상피세포중적표체수평명현제고,위OVA기인작위DNA역묘모식항원적응용제공료필요적조건.
