生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
6期
35-38
,共4页
杜庆辉%贺丽%刘双喜%张莉君%冒艳丽%朱小平%焦红梅%李国才
杜慶輝%賀麗%劉雙喜%張莉君%冒豔麗%硃小平%焦紅梅%李國纔
두경휘%하려%류쌍희%장리군%모염려%주소평%초홍매%리국재
大肠杆菌%M15%碱性磷酸酶%表达与纯化%对硝基苯磷酸二钠%活性鉴定
大腸桿菌%M15%堿性燐痠酶%錶達與純化%對硝基苯燐痠二鈉%活性鑒定
대장간균%M15%감성린산매%표체여순화%대초기분린산이납%활성감정
目的:克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性.方法:采用PCR技术从M15基因组DNA中扩增出phoA编码基因；构建其原核表达载体pCold-TF-EAP;转入E.coli BL21(DE3)进行表达；IMAC Ni-NTA柱层析法纯化重组蛋白；重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性.结果:克隆得到了序列约1 400bp phoA编码基因,原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP),纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性,有效反应温度范围大,在27℃～67℃都具有较高的催化活性,在pH7.5 ～8.0间催化活性最高.结论:克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因,为EAP的工业化生产及应用提供了生物材料.
目的:剋隆、錶達併純化大腸桿菌M15堿性燐痠酶(EAP)成熟肽(phoA),分析其活性.方法:採用PCR技術從M15基因組DNA中擴增齣phoA編碼基因；構建其原覈錶達載體pCold-TF-EAP;轉入E.coli BL21(DE3)進行錶達；IMAC Ni-NTA柱層析法純化重組蛋白；重組蛋白與底物對硝基苯燐痠二鈉顯色反應分析其活性.結果:剋隆得到瞭序列約1 400bp phoA編碼基因,原覈錶達瞭分子量約為100 kDa的融閤重組EAP(rEAP),純化穫得的rEAP具有催化燐痠單酯的活性,有效反應溫度範圍大,在27℃～67℃都具有較高的催化活性,在pH7.5 ～8.0間催化活性最高.結論:剋隆瞭可正確錶達EAP的phoA編碼基因,為EAP的工業化生產及應用提供瞭生物材料.
목적:극륭、표체병순화대장간균M15감성린산매(EAP)성숙태(phoA),분석기활성.방법:채용PCR기술종M15기인조DNA중확증출phoA편마기인；구건기원핵표체재체pCold-TF-EAP;전입E.coli BL21(DE3)진행표체；IMAC Ni-NTA주층석법순화중조단백；중조단백여저물대초기분린산이납현색반응분석기활성.결과:극륭득도료서렬약1 400bp phoA편마기인,원핵표체료분자량약위100 kDa적융합중조EAP(rEAP),순화획득적rEAP구유최화린산단지적활성,유효반응온도범위대,재27℃～67℃도구유교고적최화활성,재pH7.5 ～8.0간최화활성최고.결론:극륭료가정학표체EAP적phoA편마기인,위EAP적공업화생산급응용제공료생물재료.
