生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2012年
5期
68-71
,共4页
汤传龙%施长华%林瑛%孟清
湯傳龍%施長華%林瑛%孟清
탕전룡%시장화%림영%맹청
蛋白质内含子%断裂%变性条件%条件优化
蛋白質內含子%斷裂%變性條件%條件優化
단백질내함자%단렬%변성조건%조건우화
由蛋白质内含子介导的亲和蛋白质纯化系统(IMPACT)已得到广泛应用,通过其纯化得到的目的蛋白不含蛋白纯化标签以及多余的氨基酸残基,且操作简单成本低廉.这些优点使得其相对于其他蛋白纯化系统有着无与伦比的优势.但是现有报道都局限于非变性条件下使用,这往往会限制其在一些包涵体蛋白变性条件下使用.以一已知表达形成包涵体形式的丝素蛋白为例,研究IMPACT系统在时变性条件下使用变性剂浓度、温度和诱导断裂还原剂浓度.实验表明,在4M尿素,100 mM DTT室温作用下蛋白质内含子会获得最大断裂效率(80％).柱上在线断裂实验表明,其最终蛋白得率超过65％.
由蛋白質內含子介導的親和蛋白質純化繫統(IMPACT)已得到廣汎應用,通過其純化得到的目的蛋白不含蛋白純化標籤以及多餘的氨基痠殘基,且操作簡單成本低廉.這些優點使得其相對于其他蛋白純化繫統有著無與倫比的優勢.但是現有報道都跼限于非變性條件下使用,這往往會限製其在一些包涵體蛋白變性條件下使用.以一已知錶達形成包涵體形式的絲素蛋白為例,研究IMPACT繫統在時變性條件下使用變性劑濃度、溫度和誘導斷裂還原劑濃度.實驗錶明,在4M尿素,100 mM DTT室溫作用下蛋白質內含子會穫得最大斷裂效率(80％).柱上在線斷裂實驗錶明,其最終蛋白得率超過65％.
유단백질내함자개도적친화단백질순화계통(IMPACT)이득도엄범응용,통과기순화득도적목적단백불함단백순화표첨이급다여적안기산잔기,차조작간단성본저렴.저사우점사득기상대우기타단백순화계통유착무여륜비적우세.단시현유보도도국한우비변성조건하사용,저왕왕회한제기재일사포함체단백변성조건하사용.이일이지표체형성포함체형식적사소단백위례,연구IMPACT계통재시변성조건하사용변성제농도、온도화유도단렬환원제농도.실험표명,재4M뇨소,100 mM DTT실온작용하단백질내함자회획득최대단렬효솔(80％).주상재선단렬실험표명,기최종단백득솔초과65％.
