山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
43期
24-26
,共3页
李琴%杨清松%徐彬%毛建文
李琴%楊清鬆%徐彬%毛建文
리금%양청송%서빈%모건문
红细胞%免疫荧光技术%免疫荧光细胞化学检测方法%氯通道蛋白%溶血
紅細胞%免疫熒光技術%免疫熒光細胞化學檢測方法%氯通道蛋白%溶血
홍세포%면역형광기술%면역형광세포화학검측방법%록통도단백%용혈
erythrocytes%immunofluorescence technique%immunofluorescence cytochemical method%chloride channel protein%hemolysis
目的 以氯通道蛋白ClC-3为靶蛋白,建立一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法.方法 采集大鼠红细胞,涂片,0.5％丙烯醛/PBS固定,以不同浓度的Triton X-100/PBS(含0.1mol/L甘氨酸)溶液透膜,用含0.05 mmol/L甘氨酸、2％ BSA、0.05％ NaN3的PBS溶液封闭抗原,随后孵育ClC-3的一抗和荧光标记的二抗,最后在共聚焦荧光显微镜下观察结果.结果 0.1％ Triton X-100/PBS结合其他优化液处理的红细胞未出现溶血现象,共聚焦显微镜下清晰地观察到目的蛋白及其亚细胞分布情况.结论 通过优化固定液、透膜液、封闭液和洗涤液,解决了常规免疫细胞化学法导致红细胞易溶血的缺点,在确保红细胞不溶血的同时成功检测到红细胞氯通道ClC-3蛋白,即成功建立了一种不溶血的红细胞免疫荧光细胞化学检测方法.
目的 以氯通道蛋白ClC-3為靶蛋白,建立一種不溶血的紅細胞免疫熒光細胞化學檢測方法.方法 採集大鼠紅細胞,塗片,0.5％丙烯醛/PBS固定,以不同濃度的Triton X-100/PBS(含0.1mol/L甘氨痠)溶液透膜,用含0.05 mmol/L甘氨痠、2％ BSA、0.05％ NaN3的PBS溶液封閉抗原,隨後孵育ClC-3的一抗和熒光標記的二抗,最後在共聚焦熒光顯微鏡下觀察結果.結果 0.1％ Triton X-100/PBS結閤其他優化液處理的紅細胞未齣現溶血現象,共聚焦顯微鏡下清晰地觀察到目的蛋白及其亞細胞分佈情況.結論 通過優化固定液、透膜液、封閉液和洗滌液,解決瞭常規免疫細胞化學法導緻紅細胞易溶血的缺點,在確保紅細胞不溶血的同時成功檢測到紅細胞氯通道ClC-3蛋白,即成功建立瞭一種不溶血的紅細胞免疫熒光細胞化學檢測方法.
목적 이록통도단백ClC-3위파단백,건립일충불용혈적홍세포면역형광세포화학검측방법.방법 채집대서홍세포,도편,0.5％병희철/PBS고정,이불동농도적Triton X-100/PBS(함0.1mol/L감안산)용액투막,용함0.05 mmol/L감안산、2％ BSA、0.05％ NaN3적PBS용액봉폐항원,수후부육ClC-3적일항화형광표기적이항,최후재공취초형광현미경하관찰결과.결과 0.1％ Triton X-100/PBS결합기타우화액처리적홍세포미출현용혈현상,공취초현미경하청석지관찰도목적단백급기아세포분포정황.결론 통과우화고정액、투막액、봉폐액화세조액,해결료상규면역세포화학법도치홍세포역용혈적결점,재학보홍세포불용혈적동시성공검측도홍세포록통도ClC-3단백,즉성공건립료일충불용혈적홍세포면역형광세포화학검측방법.
