中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
11期
27-30
,共4页
王善辉%王文秀%沈志强%池贤凤%高三阳
王善輝%王文秀%瀋誌彊%池賢鳳%高三暘
왕선휘%왕문수%침지강%지현봉%고삼양
禽流感%融合表位基因%增强型绿色荧光蛋白%鸭胚成纤维细胞
禽流感%融閤錶位基因%增彊型綠色熒光蛋白%鴨胚成纖維細胞
금류감%융합표위기인%증강형록색형광단백%압배성섬유세포
本研究选择禽流感病毒H9N2株的HA的两个保守T细胞表位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),经人工合成并通过PCR扩增获得HA-M2融合表位基因,将其与含有增强型绿色荧光蛋白的载体pEGFP-N1连接,构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1.采用脂质体法转染体外培养的鸭胚成纤维细胞(DEF)后,通过RT-PCR、直接荧光观察和间接免疫荧光检测,结果表明,成功构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1,且以HA抗原表位和保守的M2e序列为基础构建的重组蛋白能够在鸭胚成纤维细胞中成功表达.本试验为研制新型的禽流感通用疫苗,进一步探索HA基因与靶细胞相互作用及AIV的感染机理等奠定了基础.
本研究選擇禽流感病毒H9N2株的HA的兩箇保守T細胞錶位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),經人工閤成併通過PCR擴增穫得HA-M2融閤錶位基因,將其與含有增彊型綠色熒光蛋白的載體pEGFP-N1連接,構建瞭重組真覈錶達質粒HA-M2-pEGFP-N1.採用脂質體法轉染體外培養的鴨胚成纖維細胞(DEF)後,通過RT-PCR、直接熒光觀察和間接免疫熒光檢測,結果錶明,成功構建瞭重組真覈錶達質粒HA-M2-pEGFP-N1,且以HA抗原錶位和保守的M2e序列為基礎構建的重組蛋白能夠在鴨胚成纖維細胞中成功錶達.本試驗為研製新型的禽流感通用疫苗,進一步探索HA基因與靶細胞相互作用及AIV的感染機理等奠定瞭基礎.
본연구선택금류감병독H9N2주적HA적량개보수T세포표위기인화M2기인포외보수서렬(M2e),경인공합성병통과PCR확증획득HA-M2융합표위기인,장기여함유증강형록색형광단백적재체pEGFP-N1련접,구건료중조진핵표체질립HA-M2-pEGFP-N1.채용지질체법전염체외배양적압배성섬유세포(DEF)후,통과RT-PCR、직접형광관찰화간접면역형광검측,결과표명,성공구건료중조진핵표체질립HA-M2-pEGFP-N1,차이HA항원표위화보수적M2e서렬위기출구건적중조단백능구재압배성섬유세포중성공표체.본시험위연제신형적금류감통용역묘,진일보탐색HA기인여파세포상호작용급AIV적감염궤리등전정료기출.
