中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2012年
6期
539-544
,共6页
苏位君%王宝玉%宋祥和%王丽娜%刘艳华%周曼倩%童玲玲%李宗金
囌位君%王寶玉%宋祥和%王麗娜%劉豔華%週曼倩%童玲玲%李宗金
소위군%왕보옥%송상화%왕려나%류염화%주만천%동령령%리종금
人胚胎干细胞%人胚胎干细胞来源内皮细胞%三维分化法%CD31
人胚胎榦細胞%人胚胎榦細胞來源內皮細胞%三維分化法%CD31
인배태간세포%인배태간세포래원내피세포%삼유분화법%CD31
目的 建立一种改良的三维分化无血清方法,对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化,并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测.方法 在低附着培养皿中培养未分化的H9hESCs12 d,使其形成类胚体(EBs),12d后将已形成的EBs收集起来,用浓度为1.5 mg/ml的I型鼠尾胶原重悬,加入六孔板中,在37℃待胶原凝固后加入EGM-2培养基培养3d,获得出芽类胚体后用0.25％胶原酶I和0.56 U/ml Liberase Blendzyme消化芽生类胚体各20 min,采用流式技术分选出其中CD31阳性的细胞,并用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)摄取实验和成管实验验证这部分细胞的内皮细胞功能.结果 建立了一种基于胶原培养环境的三维分化方法,采用这种方法能够将hESCs向内皮细胞分化的效率提高到18％,最终获得的hESC-ECs具有和人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)相似的细胞表面标志物,并在乙酰化LDL吞噬实验和血管新生实验中表现出良好的内皮细胞功能.结论 建立的改良三维分化方法能够明显提高hESCs向内皮细胞的分化效率,是一种简单高效的分化方法,同时无血清培养方法为将来hESC-ECs的临床应用提供了可能.
目的 建立一種改良的三維分化無血清方法,對人胚胎榦細胞(hESCs)嚮內皮細胞進行分化,併對這種方法得到的人胚胎榦細胞來源內皮細胞(hESC-ECs)進行功能檢測.方法 在低附著培養皿中培養未分化的H9hESCs12 d,使其形成類胚體(EBs),12d後將已形成的EBs收集起來,用濃度為1.5 mg/ml的I型鼠尾膠原重懸,加入六孔闆中,在37℃待膠原凝固後加入EGM-2培養基培養3d,穫得齣芽類胚體後用0.25％膠原酶I和0.56 U/ml Liberase Blendzyme消化芽生類胚體各20 min,採用流式技術分選齣其中CD31暘性的細胞,併用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)攝取實驗和成管實驗驗證這部分細胞的內皮細胞功能.結果 建立瞭一種基于膠原培養環境的三維分化方法,採用這種方法能夠將hESCs嚮內皮細胞分化的效率提高到18％,最終穫得的hESC-ECs具有和人臍帶靜脈內皮細胞(HUVECs)相似的細胞錶麵標誌物,併在乙酰化LDL吞噬實驗和血管新生實驗中錶現齣良好的內皮細胞功能.結論 建立的改良三維分化方法能夠明顯提高hESCs嚮內皮細胞的分化效率,是一種簡單高效的分化方法,同時無血清培養方法為將來hESC-ECs的臨床應用提供瞭可能.
목적 건립일충개량적삼유분화무혈청방법,대인배태간세포(hESCs)향내피세포진행분화,병대저충방법득도적인배태간세포래원내피세포(hESC-ECs)진행공능검측.방법 재저부착배양명중배양미분화적H9hESCs12 d,사기형성류배체(EBs),12d후장이형성적EBs수집기래,용농도위1.5 mg/ml적I형서미효원중현,가입륙공판중,재37℃대효원응고후가입EGM-2배양기배양3d,획득출아류배체후용0.25％효원매I화0.56 U/ml Liberase Blendzyme소화아생류배체각20 min,채용류식기술분선출기중CD31양성적세포,병용을선화저밀도지단백(ac-LDL)섭취실험화성관실험험증저부분세포적내피세포공능.결과 건립료일충기우효원배양배경적삼유분화방법,채용저충방법능구장hESCs향내피세포분화적효솔제고도18％,최종획득적hESC-ECs구유화인제대정맥내피세포(HUVECs)상사적세포표면표지물,병재을선화LDL탄서실험화혈관신생실험중표현출량호적내피세포공능.결론 건립적개량삼유분화방법능구명현제고hESCs향내피세포적분화효솔,시일충간단고효적분화방법,동시무혈청배양방법위장래hESC-ECs적림상응용제공료가능.
