医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2013年
6期
318-322
,共5页
丁慧%禹立霞%凌静娴%刘宝瑞%张葵%王庆飞
丁慧%禹立霞%凌靜嫻%劉寶瑞%張葵%王慶飛
정혜%우립하%릉정한%류보서%장규%왕경비
RPS7基因%shRNA%逆转录病毒载体%宫颈癌
RPS7基因%shRNA%逆轉錄病毒載體%宮頸癌
RPS7기인%shRNA%역전록병독재체%궁경암
目的 建立稳定抑制RPS7基因表达的宫颈癌HeLa细胞株.方法 设计并合成靶向人RPS7基因的shRNA寡核苷酸片段,克隆到逆转录病毒载体pSIREN中,构建重组质粒pSIREN-RPS7-shRNA,转染293T细胞,将包装产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌HeLa细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞克隆,用real-time PCR和Western印迹检测细胞中RPS7 mRNA和蛋白表达水平.结果 获得了经测序鉴定正确的重组逆转录病毒质粒,逆转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出的稳定细胞中,RPS7 mRNA和蛋白水平均显著低于干扰对照细胞.结论 成功构建了靶向人RPS7基因的shRNA逆转录病毒载体,建立了稳定抑制RPS7基因表达的宫颈癌HeLa细胞株,为进一步研究RPS7在宫颈癌中的生物学功能和作用机制提供了可靠的细胞模型.
目的 建立穩定抑製RPS7基因錶達的宮頸癌HeLa細胞株.方法 設計併閤成靶嚮人RPS7基因的shRNA寡覈苷痠片段,剋隆到逆轉錄病毒載體pSIREN中,構建重組質粒pSIREN-RPS7-shRNA,轉染293T細胞,將包裝產生的重組逆轉錄病毒感染宮頸癌HeLa細胞,經嘌呤黴素篩選穫得穩定的細胞剋隆,用real-time PCR和Western印跡檢測細胞中RPS7 mRNA和蛋白錶達水平.結果 穫得瞭經測序鑒定正確的重組逆轉錄病毒質粒,逆轉錄病毒感染HeLa細胞後用嘌呤黴素篩選齣的穩定細胞中,RPS7 mRNA和蛋白水平均顯著低于榦擾對照細胞.結論 成功構建瞭靶嚮人RPS7基因的shRNA逆轉錄病毒載體,建立瞭穩定抑製RPS7基因錶達的宮頸癌HeLa細胞株,為進一步研究RPS7在宮頸癌中的生物學功能和作用機製提供瞭可靠的細胞模型.
목적 건립은정억제RPS7기인표체적궁경암HeLa세포주.방법 설계병합성파향인RPS7기인적shRNA과핵감산편단,극륭도역전록병독재체pSIREN중,구건중조질립pSIREN-RPS7-shRNA,전염293T세포,장포장산생적중조역전록병독감염궁경암HeLa세포,경표령매소사선획득은정적세포극륭,용real-time PCR화Western인적검측세포중RPS7 mRNA화단백표체수평.결과 획득료경측서감정정학적중조역전록병독질립,역전록병독감염HeLa세포후용표령매소사선출적은정세포중,RPS7 mRNA화단백수평균현저저우간우대조세포.결론 성공구건료파향인RPS7기인적shRNA역전록병독재체,건립료은정억제RPS7기인표체적궁경암HeLa세포주,위진일보연구RPS7재궁경암중적생물학공능화작용궤제제공료가고적세포모형.
