四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2012年
6期
1357-1363
,共7页
田永帅%陈义辉%刘珺%万小平%杨鑫%王红宁%高荣
田永帥%陳義輝%劉珺%萬小平%楊鑫%王紅寧%高榮
전영수%진의휘%류군%만소평%양흠%왕홍저%고영
猪IL-10基因%RNA干扰%基因表达%猪繁殖与呼吸综合征病毒%免疫细胞
豬IL-10基因%RNA榦擾%基因錶達%豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%免疫細胞
저IL-10기인%RNA간우%기인표체%저번식여호흡종합정병독%면역세포
为了研究藏猪免疫细胞中IL-10基因表达抑制后对RNA病毒感染及其免疫应答的影响,本实验构建和筛选了抑制猪IL-10基因表达的shRNA干扰分子及其表达载体,并以新型的壳聚糖接枝聚乙二醇和聚乙烯亚胺修饰分子(CS-N-PEI-PEG)通过离子交联法进行分子包装,制备DNA-壳聚糖纳米分子,体外转染藏猪免疫细胞,观察猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)诱导免疫细胞IL-10基因的表达及其增殖感染水平.实验结果表明:与未转染纳米分子或者纳米分子不表达shRNA的空白对照组相比较,shRNA实验组的IL-10基因表达在24～72 h内明显抑制(P＜0.05),免疫细胞中PRRSV的增殖水平显著下降(P＜0.05)；同时IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ基因的mRNA水平明显升高(P＜0.05).这些提示IL-10的shRNA转染能使免疫细胞的抗感染能力显著增强,甚至可完全抑制PRRSV的复制.
為瞭研究藏豬免疫細胞中IL-10基因錶達抑製後對RNA病毒感染及其免疫應答的影響,本實驗構建和篩選瞭抑製豬IL-10基因錶達的shRNA榦擾分子及其錶達載體,併以新型的殼聚糖接枝聚乙二醇和聚乙烯亞胺脩飾分子(CS-N-PEI-PEG)通過離子交聯法進行分子包裝,製備DNA-殼聚糖納米分子,體外轉染藏豬免疫細胞,觀察豬繁殖和呼吸障礙綜閤徵病毒(PRRSV)誘導免疫細胞IL-10基因的錶達及其增殖感染水平.實驗結果錶明:與未轉染納米分子或者納米分子不錶達shRNA的空白對照組相比較,shRNA實驗組的IL-10基因錶達在24～72 h內明顯抑製(P＜0.05),免疫細胞中PRRSV的增殖水平顯著下降(P＜0.05)；同時IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ基因的mRNA水平明顯升高(P＜0.05).這些提示IL-10的shRNA轉染能使免疫細胞的抗感染能力顯著增彊,甚至可完全抑製PRRSV的複製.
위료연구장저면역세포중IL-10기인표체억제후대RNA병독감염급기면역응답적영향,본실험구건화사선료억제저IL-10기인표체적shRNA간우분자급기표체재체,병이신형적각취당접지취을이순화취을희아알수식분자(CS-N-PEI-PEG)통과리자교련법진행분자포장,제비DNA-각취당납미분자,체외전염장저면역세포,관찰저번식화호흡장애종합정병독(PRRSV)유도면역세포IL-10기인적표체급기증식감염수평.실험결과표명:여미전염납미분자혹자납미분자불표체shRNA적공백대조조상비교,shRNA실험조적IL-10기인표체재24～72 h내명현억제(P＜0.05),면역세포중PRRSV적증식수평현저하강(P＜0.05)；동시IL-2、IL-4、IL-6화IFN-γ기인적mRNA수평명현승고(P＜0.05).저사제시IL-10적shRNA전염능사면역세포적항감염능력현저증강,심지가완전억제PRRSV적복제.
