农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
5期
552-560
,共9页
刘向阳%孙修炼%张忠信%周琳
劉嚮暘%孫脩煉%張忠信%週琳
류향양%손수련%장충신%주림
苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)%GP37蛋白%Bac-to-Bac杆状病毒表达系统%真核表达%亚细胞定位
蘋果蠹蛾顆粒體病毒(CpGV)%GP37蛋白%Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統%真覈錶達%亞細胞定位
평과두아과립체병독(CpGV)%GP37단백%Bac-to-Bac간상병독표체계통%진핵표체%아세포정위
Cydia pomonella granulovirus(CpGV)%GP37%Bac-to-Bac baculovirus system%Eukaryotic expression%Subcellular localization
苹果蠹蛾颗粒体病毒(Cydia pomonella granulovirus,CpGV)是防治苹果蠹蛾最重要的生物药剂之一,为探寻苹果CpGV GP37蛋白的增效机制,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将苹果CpGV gp37基因和绿色荧光蛋白基因(egfp)以N端或C端融合的方式插入苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleocapsid NPV,AcMNPV)基因组中,获得重组的杆状病毒质粒(bacmid),转染昆虫细胞Sf9,然后进行Western blot检测.结果显示,检测到GP37和EGFP的融合蛋白(vAcEGFPGP37、vAcGP37EGFP)和非融合蛋白(vAcGP37、vAcEGFP)都得到了高效表达;用激光共聚焦显微镜观察蛋白的亚细胞定位情况,融合GP37的EGFP主要聚集在细胞质中,没有融合GP37的EGFP遍布整个细胞,说明CpGV GP37蛋白定位于细胞质中.本实验研究了CpGV GP37蛋白的真核表达,为该蛋白的后续研究提供了条件;而该蛋白的亚细胞定位研究,不仅为CpGV GP37蛋白增效机制的研究提供了基础资料,同时丰富了杆状病毒GP37蛋白的相关理论.
蘋果蠹蛾顆粒體病毒(Cydia pomonella granulovirus,CpGV)是防治蘋果蠹蛾最重要的生物藥劑之一,為探尋蘋果CpGV GP37蛋白的增效機製,本研究利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統,將蘋果CpGV gp37基因和綠色熒光蛋白基因(egfp)以N耑或C耑融閤的方式插入苜蓿銀紋夜蛾覈多角體病毒(Autographa californica multiple nucleocapsid NPV,AcMNPV)基因組中,穫得重組的桿狀病毒質粒(bacmid),轉染昆蟲細胞Sf9,然後進行Western blot檢測.結果顯示,檢測到GP37和EGFP的融閤蛋白(vAcEGFPGP37、vAcGP37EGFP)和非融閤蛋白(vAcGP37、vAcEGFP)都得到瞭高效錶達;用激光共聚焦顯微鏡觀察蛋白的亞細胞定位情況,融閤GP37的EGFP主要聚集在細胞質中,沒有融閤GP37的EGFP遍佈整箇細胞,說明CpGV GP37蛋白定位于細胞質中.本實驗研究瞭CpGV GP37蛋白的真覈錶達,為該蛋白的後續研究提供瞭條件;而該蛋白的亞細胞定位研究,不僅為CpGV GP37蛋白增效機製的研究提供瞭基礎資料,同時豐富瞭桿狀病毒GP37蛋白的相關理論.
평과두아과립체병독(Cydia pomonella granulovirus,CpGV)시방치평과두아최중요적생물약제지일,위탐심평과CpGV GP37단백적증효궤제,본연구이용Bac-to-Bac간상병독표체계통,장평과CpGV gp37기인화록색형광단백기인(egfp)이N단혹C단융합적방식삽입목숙은문야아핵다각체병독(Autographa californica multiple nucleocapsid NPV,AcMNPV)기인조중,획득중조적간상병독질립(bacmid),전염곤충세포Sf9,연후진행Western blot검측.결과현시,검측도GP37화EGFP적융합단백(vAcEGFPGP37、vAcGP37EGFP)화비융합단백(vAcGP37、vAcEGFP)도득도료고효표체;용격광공취초현미경관찰단백적아세포정위정황,융합GP37적EGFP주요취집재세포질중,몰유융합GP37적EGFP편포정개세포,설명CpGV GP37단백정위우세포질중.본실험연구료CpGV GP37단백적진핵표체,위해단백적후속연구제공료조건;이해단백적아세포정위연구,불부위CpGV GP37단백증효궤제적연구제공료기출자료,동시봉부료간상병독GP37단백적상관이론.
