温州医科大学学报
溫州醫科大學學報
온주의과대학학보
Journal of Wenzhou Medical University
2014年
3期
161-165
,共5页
陈潇%周浩%周希%蔡洁洁%陈灵芝%郑高暑%黄伟剑%张怀勤
陳瀟%週浩%週希%蔡潔潔%陳靈芝%鄭高暑%黃偉劍%張懷勤
진소%주호%주희%채길길%진령지%정고서%황위검%장부근
松弛素%内皮细胞间质化%TGF-β%心肌纤维化
鬆弛素%內皮細胞間質化%TGF-β%心肌纖維化
송이소%내피세포간질화%TGF-β%심기섬유화
relaxin%endothelial to mesenchymal transition%TGF-β%myocardial fibrosis
目的:探讨松弛素(RLX)对TGF-β诱导的内皮细胞间质化现象的影响.方法:采用体外分离的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外细胞模型,通过TGF-β 10 ng/mL诱导内皮细胞间质化,100 ng/mL和200 ng/mL RLX分别预处理,再与TGF-β联合培养48 h.光镜下观察细胞形态学改变,CCK-8实验和transwe11实验检测细胞增殖和迁移能力,免疫荧光单双染技术观察vimentin和CD31的表达变化,蛋白免疫印迹技术观察各实验组vimentin、CD31、ve-cadherin和α-SMA的蛋白表达.结果:阴性对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β诱导组细胞形态向梭形转化,呈扩散迁移趋势.与阴性对照组相比,TGF-β诱导组细胞增殖、迁移能力明显增强;而RLX可抑制TGF-β诱导的增殖和迁移.免疫荧光单染结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin明显上升;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31表达上调而vimentin表达下调.免疫荧光双染结果显示,阴性对照组以内皮性质的细胞为主,仅存在少量的CD31和vimentin双阳性细胞;TGF-β诱导组双阳性细胞明显增多;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组间质效应的双阳性细胞下调,而内皮效应的双阳性细胞增多.蛋白免疫印迹结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31 (0.36±0.076 vs 0.88±0.086)和ve-cadherin (0.54±0.046 vs 1.09±0.13)表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin (0.72±0.102 vs 0.21±0.081)和α-SMA(o.88±0.084 vs 0.24±0.046)明显上升(P＜0.05);与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31 (0.67±0.09、0.59±0.12 vs 0.36±0.076)和ve-cadherin(0.85±0.09、0.72±0.064 vs 0.54±0.046)表达上调,而vimentin (0.56±0.011、0.48±0.06 vs 0.72±0.102)和α-SMA (0.65±0.081、0.54±0.032 vs 0.88±0.084)表达下降(P＜ 0.05),且呈剂量依赖性.结论:RLX可抑制TGF-β诱导的内皮细胞向间质化细胞转化.
目的:探討鬆弛素(RLX)對TGF-β誘導的內皮細胞間質化現象的影響.方法:採用體外分離的人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)作為體外細胞模型,通過TGF-β 10 ng/mL誘導內皮細胞間質化,100 ng/mL和200 ng/mL RLX分彆預處理,再與TGF-β聯閤培養48 h.光鏡下觀察細胞形態學改變,CCK-8實驗和transwe11實驗檢測細胞增殖和遷移能力,免疫熒光單雙染技術觀察vimentin和CD31的錶達變化,蛋白免疫印跡技術觀察各實驗組vimentin、CD31、ve-cadherin和α-SMA的蛋白錶達.結果:陰性對照組內皮細胞呈鋪路石樣生長,TGF-β誘導組細胞形態嚮梭形轉化,呈擴散遷移趨勢.與陰性對照組相比,TGF-β誘導組細胞增殖、遷移能力明顯增彊;而RLX可抑製TGF-β誘導的增殖和遷移.免疫熒光單染結果顯示,與陰性對照組相比,TGF-β誘導組內皮細胞特異性蛋白CD31錶達下調而間質細胞標誌性蛋白vimentin明顯上升;與TGF-β組相比,RLX聯閤TGF-β處理組CD31錶達上調而vimentin錶達下調.免疫熒光雙染結果顯示,陰性對照組以內皮性質的細胞為主,僅存在少量的CD31和vimentin雙暘性細胞;TGF-β誘導組雙暘性細胞明顯增多;與TGF-β組相比,RLX聯閤TGF-β處理組間質效應的雙暘性細胞下調,而內皮效應的雙暘性細胞增多.蛋白免疫印跡結果顯示,與陰性對照組相比,TGF-β誘導組內皮細胞特異性蛋白CD31 (0.36±0.076 vs 0.88±0.086)和ve-cadherin (0.54±0.046 vs 1.09±0.13)錶達下調而間質細胞標誌性蛋白vimentin (0.72±0.102 vs 0.21±0.081)和α-SMA(o.88±0.084 vs 0.24±0.046)明顯上升(P＜0.05);與TGF-β組相比,RLX聯閤TGF-β處理組CD31 (0.67±0.09、0.59±0.12 vs 0.36±0.076)和ve-cadherin(0.85±0.09、0.72±0.064 vs 0.54±0.046)錶達上調,而vimentin (0.56±0.011、0.48±0.06 vs 0.72±0.102)和α-SMA (0.65±0.081、0.54±0.032 vs 0.88±0.084)錶達下降(P＜ 0.05),且呈劑量依賴性.結論:RLX可抑製TGF-β誘導的內皮細胞嚮間質化細胞轉化.
목적:탐토송이소(RLX)대TGF-β유도적내피세포간질화현상적영향.방법:채용체외분리적인제정맥내피세포(HUVECs)작위체외세포모형,통과TGF-β 10 ng/mL유도내피세포간질화,100 ng/mL화200 ng/mL RLX분별예처리,재여TGF-β연합배양48 h.광경하관찰세포형태학개변,CCK-8실험화transwe11실험검측세포증식화천이능력,면역형광단쌍염기술관찰vimentin화CD31적표체변화,단백면역인적기술관찰각실험조vimentin、CD31、ve-cadherin화α-SMA적단백표체.결과:음성대조조내피세포정포로석양생장,TGF-β유도조세포형태향사형전화,정확산천이추세.여음성대조조상비,TGF-β유도조세포증식、천이능력명현증강;이RLX가억제TGF-β유도적증식화천이.면역형광단염결과현시,여음성대조조상비,TGF-β유도조내피세포특이성단백CD31표체하조이간질세포표지성단백vimentin명현상승;여TGF-β조상비,RLX연합TGF-β처리조CD31표체상조이vimentin표체하조.면역형광쌍염결과현시,음성대조조이내피성질적세포위주,부존재소량적CD31화vimentin쌍양성세포;TGF-β유도조쌍양성세포명현증다;여TGF-β조상비,RLX연합TGF-β처리조간질효응적쌍양성세포하조,이내피효응적쌍양성세포증다.단백면역인적결과현시,여음성대조조상비,TGF-β유도조내피세포특이성단백CD31 (0.36±0.076 vs 0.88±0.086)화ve-cadherin (0.54±0.046 vs 1.09±0.13)표체하조이간질세포표지성단백vimentin (0.72±0.102 vs 0.21±0.081)화α-SMA(o.88±0.084 vs 0.24±0.046)명현상승(P＜0.05);여TGF-β조상비,RLX연합TGF-β처리조CD31 (0.67±0.09、0.59±0.12 vs 0.36±0.076)화ve-cadherin(0.85±0.09、0.72±0.064 vs 0.54±0.046)표체상조,이vimentin (0.56±0.011、0.48±0.06 vs 0.72±0.102)화α-SMA (0.65±0.081、0.54±0.032 vs 0.88±0.084)표체하강(P＜ 0.05),차정제량의뢰성.결론:RLX가억제TGF-β유도적내피세포향간질화세포전화.
