医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2014年
5期
82-86
,共5页
刘影%于涛%林伟%邬恒夫
劉影%于濤%林偉%鄔恆伕
류영%우도%림위%오항부
肌凝蛋白轻链蛋白-2%腺相关病毒%钠/碘转运体%碘放射性核素
肌凝蛋白輕鏈蛋白-2%腺相關病毒%鈉/碘轉運體%碘放射性覈素
기응단백경련단백-2%선상관병독%납/전전운체%전방사성핵소
Myosin light chain-2%Recombinant adenoassociated virus%Sodium/iodide symporter%Radioiodine
目的 构建肌凝蛋白轻链蛋白-2(myosin light chain-2,MLC-2p)启动子调控的钠/碘转运体(sodium/iodide symporter,NIS)的腺相关病毒载体,探讨外源基因在心肌细胞中特异性表达的可行性.方法 构建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS重组腺相关病毒,经酶切鉴定及效价测定.rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS体外感染心肌细胞和非心肌细胞,行动态摄碘及NaClO4抑制实验观察NIS蛋白的功能和特性.结果 成功构建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS,测得效价为rAAV9-rMLC-2p-rNIS 2.46×1012μg/ml,rAAV9-CMV-rNIS 4.21×1012μg/ml.动态摄碘实验表明感染rAAV9-rMLC-2p-rNIS的心肌细胞的Na125I摄取明显高于非心肌细胞,且能被NaClO4特异性抑制,证实了rMLC-2p启动子的心肌特异性及转染细胞表达的rNIS蛋白有功能.结论 成功构建了MLC-2p启动子调控NIS的腺相关病毒载体,证实了外源基因在心肌细胞中的特异性表达,为进一步以该报告基因系统的体内动物实验打下基础.
目的 構建肌凝蛋白輕鏈蛋白-2(myosin light chain-2,MLC-2p)啟動子調控的鈉/碘轉運體(sodium/iodide symporter,NIS)的腺相關病毒載體,探討外源基因在心肌細胞中特異性錶達的可行性.方法 構建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS重組腺相關病毒,經酶切鑒定及效價測定.rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS體外感染心肌細胞和非心肌細胞,行動態攝碘及NaClO4抑製實驗觀察NIS蛋白的功能和特性.結果 成功構建rAAV9-rMLC-2p-rNIS及rAAV9-CMV-rNIS,測得效價為rAAV9-rMLC-2p-rNIS 2.46×1012μg/ml,rAAV9-CMV-rNIS 4.21×1012μg/ml.動態攝碘實驗錶明感染rAAV9-rMLC-2p-rNIS的心肌細胞的Na125I攝取明顯高于非心肌細胞,且能被NaClO4特異性抑製,證實瞭rMLC-2p啟動子的心肌特異性及轉染細胞錶達的rNIS蛋白有功能.結論 成功構建瞭MLC-2p啟動子調控NIS的腺相關病毒載體,證實瞭外源基因在心肌細胞中的特異性錶達,為進一步以該報告基因繫統的體內動物實驗打下基礎.
목적 구건기응단백경련단백-2(myosin light chain-2,MLC-2p)계동자조공적납/전전운체(sodium/iodide symporter,NIS)적선상관병독재체,탐토외원기인재심기세포중특이성표체적가행성.방법 구건rAAV9-rMLC-2p-rNIS급rAAV9-CMV-rNIS중조선상관병독,경매절감정급효개측정.rAAV9-rMLC-2p-rNIS급rAAV9-CMV-rNIS체외감염심기세포화비심기세포,행동태섭전급NaClO4억제실험관찰NIS단백적공능화특성.결과 성공구건rAAV9-rMLC-2p-rNIS급rAAV9-CMV-rNIS,측득효개위rAAV9-rMLC-2p-rNIS 2.46×1012μg/ml,rAAV9-CMV-rNIS 4.21×1012μg/ml.동태섭전실험표명감염rAAV9-rMLC-2p-rNIS적심기세포적Na125I섭취명현고우비심기세포,차능피NaClO4특이성억제,증실료rMLC-2p계동자적심기특이성급전염세포표체적rNIS단백유공능.결론 성공구건료MLC-2p계동자조공NIS적선상관병독재체,증실료외원기인재심기세포중적특이성표체,위진일보이해보고기인계통적체내동물실험타하기출.
