CAJ | 학술논문

目的研究炎症介质-脂多糖(LPS)诱导的炎症应激是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2(SCAP-SREBP2)复合物介导的低密度脂蛋白受体(LDLr)负反馈调控,增加THP-1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成.方法诱导分化成功的THP-1巨噬细胞在无血清培养基中培养4 h后,分为对照组(继续无血清培养),高脂组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1),高脂加炎症刺激组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1,同时加入炎症介质LPS,终浓度200 μg·L-1),单纯炎症刺激组(加入炎症介质LPS,终浓度200 μg·L-1),以上各组细胞培养24 h后收获.ELISA法检测细胞培养基中TNF-α 浓度,酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,琼脂糖电泳检测LDL氧化程度,Real time PCR 法检测LDLr、SREBP2和SCAP mRNA 表达水平,Western blot法检测LDLr、SREBP2和SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况.结果细胞内胆固醇测定发现,炎症介质LPS通过增加THP-1巨噬细胞对非修饰LDL摄取,导致巨噬细胞转变为泡沫细胞.在无炎症介质LPS时,25 mg·L-1 LDL减少LDLr mRNA和蛋白表达(P<0.05).然而,LPS增加LDLr mRNA和蛋白表达,逆转25 mg·L-1 LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了巨噬细胞对LDL摄取(P<0.05),LPS刺激也导致了SCAP和SREBP2的mRNA和蛋白过表达(P<0.05),同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体.这些结果提示LPS干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在巨噬细胞内堆积,导致泡沫细胞形成.结论本研究提示,在LPS诱导的炎症应激状态条件下,天然LDL可以通过LDLr被巨噬细胞大量摄取入细胞内,导致泡沫细胞形成,这可能是巨噬细胞泡沫化的另一条通路.
목적 연구염증개질-지다당(LPS)유도적염증응격시부통과우란고순조절원건결합단백렬해격활단백-고순조절원건결합단백2(SCAP-SREBP2)복합물개도적저밀도지단백수체(LDLr)부반궤조공,증가THP-1거서세포대비수식저밀도지단백담고순(LDL)섭취,도치포말세포형성.방법 유도분화성공적THP-1거서세포재무혈청배양기중배양4 h후,분위대조조(계속무혈청배양),고지조(가입LDL부하,종농도위25 mg·L-1),고지가염증자격조(가입LDL부하,종농도위25 mg·L-1,동시가입염증개질LPS,종농도200 μg·L-1),단순염증자격조(가입염증개질LPS,종농도200 μg·L-1),이상각조세포배양24 h후수획.ELISA법검측세포배양기중TNF-α 농도,매화학법검측세포내담고순농도,경지당전영검측LDL양화정도,Real time PCR 법검측LDLr、SREBP2화SCAP mRNA 표체수평,Western blot법검측LDLr、SREBP2화SCAP단백표체,격광공취초검측SCAP재내질망여고이기체간적전위정황.결과 세포내담고순측정발현,염증개질LPS통과증가THP-1거서세포대비수식LDL섭취,도치거서세포전변위포말세포.재무염증개질LPS시,25 mg·L-1 LDL감소LDLr mRNA화단백표체(P<0.05).연이,LPS증가LDLr mRNA화단백표체,역전25 mg·L-1 LDL대LDLr적억제효응,불흡당적증가료거서세포대LDL섭취(P<0.05),LPS자격야도치료SCAP화SREBP2적mRNA화단백과표체(P<0.05),동시촉진료SCAP종내질망전이도고이기체.저사결과제시LPS간우료담고순개도적LDLr부반궤조공,사비수식LDL재거서세포내퇴적,도치포말세포형성.결론 본연구제시,재LPS유도적염증응격상태조건하,천연LDL가이통과LDLr피거서세포대량섭취입세포내,도치포말세포형성,저가능시거서세포포말화적령일조통로.