浙江农林大学学报
浙江農林大學學報
절강농림대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG FORESTRY COLLEGE
2013年
4期
620-626
,共7页
武冲%仲崇禄%张勇%姜清彬%陈羽%陈珍
武遲%仲崇祿%張勇%薑清彬%陳羽%陳珍
무충%중숭록%장용%강청빈%진우%진진
林木育种学%麻楝%ISSR%PCR条件%优化
林木育種學%痳楝%ISSR%PCR條件%優化
림목육충학%마련%ISSR%PCR조건%우화
forest tree breeding%Chukrasia tabularis%inter simple sequence repeat (ISSR)%polymerase chain reaction (PCR) conditions%optimization
模板DNA、引物、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs),镁离子(Mg2+)浓度、Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的主要因素.以麻楝Chukrasia tabularis叶片基因组DNA为试验材料,系统地测试这6个因素对麻楝ISSR-PCR反应结果的影响.结果表明:最优的反应体系为20 μL反应体系中含30 ng模板DNA,1.00 μmol ·L-1随机引物,0.15 mmol·L-1dNTPs,2.50 mmol·L-1 Mg2+,2.50×16.67nkat Taq DNA聚合酶.最佳退火温度为56℃,ISSR-PCR反应程序为94℃预变性5.0 min,94℃变性45 s,56℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,40个循环；72℃再延伸7.0 min,4℃保存.应用优化的ISSR-PCR反应体系对24份麻楝个体材料进行扩增,均能扩增出丰富稳定的条带.
模闆DNA、引物、三燐痠堿基脫氧覈苷痠(dNTPs),鎂離子(Mg2+)濃度、Taq DNA聚閤酶的用量以及退火溫度是影響簡單序列重複區間擴增-聚閤酶鏈式反應(ISSR-PCR)的主要因素.以痳楝Chukrasia tabularis葉片基因組DNA為試驗材料,繫統地測試這6箇因素對痳楝ISSR-PCR反應結果的影響.結果錶明:最優的反應體繫為20 μL反應體繫中含30 ng模闆DNA,1.00 μmol ·L-1隨機引物,0.15 mmol·L-1dNTPs,2.50 mmol·L-1 Mg2+,2.50×16.67nkat Taq DNA聚閤酶.最佳退火溫度為56℃,ISSR-PCR反應程序為94℃預變性5.0 min,94℃變性45 s,56℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,40箇循環；72℃再延伸7.0 min,4℃保存.應用優化的ISSR-PCR反應體繫對24份痳楝箇體材料進行擴增,均能擴增齣豐富穩定的條帶.
모판DNA、인물、삼린산감기탈양핵감산(dNTPs),미리자(Mg2+)농도、Taq DNA취합매적용량이급퇴화온도시영향간단서렬중복구간확증-취합매련식반응(ISSR-PCR)적주요인소.이마련Chukrasia tabularis협편기인조DNA위시험재료,계통지측시저6개인소대마련ISSR-PCR반응결과적영향.결과표명:최우적반응체계위20 μL반응체계중함30 ng모판DNA,1.00 μmol ·L-1수궤인물,0.15 mmol·L-1dNTPs,2.50 mmol·L-1 Mg2+,2.50×16.67nkat Taq DNA취합매.최가퇴화온도위56℃,ISSR-PCR반응정서위94℃예변성5.0 min,94℃변성45 s,56℃퇴화45 s,72℃연신1.5 min,40개순배；72℃재연신7.0 min,4℃보존.응용우화적ISSR-PCR반응체계대24빈마련개체재료진행확증,균능확증출봉부은정적조대.
