色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2013年
7期
684-690
,共7页
体积排阻色谱%抗凝血因子Xa%低分子量肝素
體積排阻色譜%抗凝血因子Xa%低分子量肝素
체적배조색보%항응혈인자Xa%저분자량간소
size exclusion chromatography (SEC)%anti-factor Xa activity%low molecular weight heparins
发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法.利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa (FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性.首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间.底物被FXa水解,产生游离的pNA.体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰.该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测.
髮展瞭一種基于體積排阻色譜測定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法.利用肝素與抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)結閤後可增彊ATⅢ對凝血因子Xa (FXa)抑製作用的原理,通過測定加入LMWH後FXa水解其生色底物產生對硝基苯胺(pNA)這一反應的抑製程度確定LMWH的活性.首先將含有一定濃度LMWH的緩遲溶液與ATⅢ溶液混閤,然後依次加入FXa和生色底物,分彆孵育一段時間.底物被FXa水解,產生遊離的pNA.體積排阻色譜可將小分子產物pNA與其他大分子分離開,因而可以在pNA的最大吸收波長下得到高靈敏度的測定,併且不再受其他成分的榦擾.該方法重複性好,靈敏度高,極大地減少瞭樣品的消耗量,降低瞭成本,併且還可進行各種複雜樣品(如血漿)中LMWH抗FXa活性的鑑測.
발전료일충기우체적배조색보측정저분자량간소(LMWH)항응혈활성적방법.이용간소여항응혈매Ⅲ(ATⅢ)결합후가증강ATⅢ대응혈인자Xa (FXa)억제작용적원리,통과측정가입LMWH후FXa수해기생색저물산생대초기분알(pNA)저일반응적억제정도학정LMWH적활성.수선장함유일정농도LMWH적완충용액여ATⅢ용액혼합,연후의차가입FXa화생색저물,분별부육일단시간.저물피FXa수해,산생유리적pNA.체적배조색보가장소분자산물pNA여기타대분자분리개,인이가이재pNA적최대흡수파장하득도고령민도적측정,병차불재수기타성분적간우.해방법중복성호,령민도고,겁대지감소료양품적소모량,강저료성본,병차환가진행각충복잡양품(여혈장)중LMWH항FXa활성적감측.
