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CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2013年
7期
646-655
,共10页
张倩倩%张雪佩%张含智%康经武
張倩倩%張雪珮%張含智%康經武
장천천%장설패%장함지%강경무
毛细管电泳%激光诱导荧光检测%蛋白激酶抑制剂筛选%选择性评价
毛細管電泳%激光誘導熒光檢測%蛋白激酶抑製劑篩選%選擇性評價
모세관전영%격광유도형광검측%단백격매억제제사선%선택성평개
capillary electrophoresis (CE)%laser-induced fluorescence detection%protein kinase inhibitor screening%selectivity assessment
发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法.CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能.共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立.特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽.同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性.与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本.
髮展瞭一種基于毛細管電泳(CE)-激光誘導熒光(LIF)檢測的多箇細胞內源激酶的抑製劑平行篩選及選擇性評價方法.CE高效的分離能力和LIF檢測器的高選擇性,使得同時測試多箇胞內激酶的活性成為可能.共4種細胞繫、3種特異性蛋白激酶底物肽、2種選擇性蛋白激酶抑製劑和1種非選擇性蛋白激酶抑製劑用于方法的建立.特異性底物肽與細胞裂解液混閤後孵育,被其相應的激酶選擇性地燐痠化,利用CE-LIF分離檢測燐痠化產物和底物肽.同時測定一箇抑製劑對幾種蛋白激酶的抑製活性,用于評價抑製劑的選擇性.與傳統的單靶標篩選模式相比,這種基于細胞裂解液的多靶標篩選方法能提供更多的信息,更加高效,且細胞裂解液作為一種廉價的激酶來源大大降低瞭篩選成本.
발전료일충기우모세관전영(CE)-격광유도형광(LIF)검측적다개세포내원격매적억제제평행사선급선택성평개방법.CE고효적분리능력화LIF검측기적고선택성,사득동시측시다개포내격매적활성성위가능.공4충세포계、3충특이성단백격매저물태、2충선택성단백격매억제제화1충비선택성단백격매억제제용우방법적건립.특이성저물태여세포렬해액혼합후부육,피기상응적격매선택성지린산화,이용CE-LIF분리검측린산화산물화저물태.동시측정일개억제제대궤충단백격매적억제활성,용우평개억제제적선택성.여전통적단파표사선모식상비,저충기우세포렬해액적다파표사선방법능제공경다적신식,경가고효,차세포렬해액작위일충렴개적격매래원대대강저료사선성본.
