医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2013年
8期
48-51
,共4页
杨亚冬%张文元%李颖%房国坚%张科技
楊亞鼕%張文元%李穎%房國堅%張科技
양아동%장문원%리영%방국견%장과기
角朊细胞%CK19%CK10%CK14%整合素β1%RT-PCR
角朊細胞%CK19%CK10%CK14%整閤素β1%RT-PCR
각원세포%CK19%CK10%CK14%정합소β1%RT-PCR
Keratinocytes%Cytokeratin 19%Cytokeratin 10%Cytokeratin 14%Integrin β1%RT-PCR
目的 探讨SD大鼠角朊细胞的分离培养技术并鉴定,观察细胞生长情况.方法 采用中性蛋白酶(DispaseⅡ)和胰蛋白酶分离角朊细胞,加入含有10％胎牛血清的角质化细胞专用培养基(keratinocyte serum free,K-SFM)培养.用免疫组化法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法进行鉴定.结果 角朊细胞生长缓慢,原代培养第5天开始出现细胞克隆,核大而圆,培养11天连成片,培养24天长满单层,细胞传代培养比较困难,很难贴壁,经摸索在培养第15天,细胞长满80％左右时即可传代,但一般传3代后就不能再传.大鼠角朊细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)染色,细胞质呈棕褐色,提示培养的细胞CK19阳性.大鼠角朊细胞标志RT-PCR检测整合素β1、CK14(cytokeratin 14)、CK10(cytokeratin 10)的mRNA表达均阳性.结论 用两种酶分离获得的大鼠角朊细胞活性好,降低成纤维细胞污染,用K-SFM培养基培养的细胞经鉴定具有角朊细胞特性,为皮肤组织工程的研究提供良好的种子细胞方面的实验数据.
目的 探討SD大鼠角朊細胞的分離培養技術併鑒定,觀察細胞生長情況.方法 採用中性蛋白酶(DispaseⅡ)和胰蛋白酶分離角朊細胞,加入含有10％胎牛血清的角質化細胞專用培養基(keratinocyte serum free,K-SFM)培養.用免疫組化法和反轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法進行鑒定.結果 角朊細胞生長緩慢,原代培養第5天開始齣現細胞剋隆,覈大而圓,培養11天連成片,培養24天長滿單層,細胞傳代培養比較睏難,很難貼壁,經摸索在培養第15天,細胞長滿80％左右時即可傳代,但一般傳3代後就不能再傳.大鼠角朊細胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)染色,細胞質呈棕褐色,提示培養的細胞CK19暘性.大鼠角朊細胞標誌RT-PCR檢測整閤素β1、CK14(cytokeratin 14)、CK10(cytokeratin 10)的mRNA錶達均暘性.結論 用兩種酶分離穫得的大鼠角朊細胞活性好,降低成纖維細胞汙染,用K-SFM培養基培養的細胞經鑒定具有角朊細胞特性,為皮膚組織工程的研究提供良好的種子細胞方麵的實驗數據.
목적 탐토SD대서각원세포적분리배양기술병감정,관찰세포생장정황.방법 채용중성단백매(DispaseⅡ)화이단백매분리각원세포,가입함유10％태우혈청적각질화세포전용배양기(keratinocyte serum free,K-SFM)배양.용면역조화법화반전록취합매련반응(RT-PCR)법진행감정.결과 각원세포생장완만,원대배양제5천개시출현세포극륭,핵대이원,배양11천련성편,배양24천장만단층,세포전대배양비교곤난,흔난첩벽,경모색재배양제15천,세포장만80％좌우시즉가전대,단일반전3대후취불능재전.대서각원세포각단백19(cytokeratin 19,CK19)염색,세포질정종갈색,제시배양적세포CK19양성.대서각원세포표지RT-PCR검측정합소β1、CK14(cytokeratin 14)、CK10(cytokeratin 10)적mRNA표체균양성.결론 용량충매분리획득적대서각원세포활성호,강저성섬유세포오염,용K-SFM배양기배양적세포경감정구유각원세포특성,위피부조직공정적연구제공량호적충자세포방면적실험수거.
