CAJ | 학술논문

背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin I(Ph I)与癌症的发展有密切关系.我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库.本研究对该库进行筛选,得到抗Prx I肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi I和Not I双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx I为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集.将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测.放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx I的表达水平.结果:seFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带.在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍.ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%.SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗Prx I肺腺癌单链抗体.被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx I蛋白表达水平的下降.结论:从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx I肺腺癌单链抗体.单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖.
배경여목적:연구표명과양화물매Peroxiredoxin I(Ph I)여암증적발전유밀절관계.아문이통과서균체전시기술구건료폐선암상관적인원단련항체고.본연구대해고진행사선,득도항Prx I폐선암단련항체,병검측기대폐선암세포A549증식적억제작용.방법:PCR법검측TG1중scFv기인삽입솔,1%경지당응효전영감정Sfi I화Not I쌍매절질립적결과,이A549세포급재폐암중고표체적항양화단백Prx I위파항원분별대항체고진행3륜사선부집.장양성극륭용IPTG유도표체병진행검측.방사성핵소계수법측정세포단련항체내섭수평,MTT법급류식세포술검측단련항체대A549세포적증식억제화조망정황,면역인적법검측항체작용A549세포후Prx I적표체수평.결과:seFv기인삽입솔위77%,쌍매절감정검측도목적조대.재친화사선과정중,폐선암단련항체득도부집,수획솔축륜제고,제6륜위제1륜적180배.ELISA법검측도재수궤선취적10개극륭중,유6개여A549세포정양성반응,양성솔60%.SDS-PAGE급ELISA검측증실득도인원항Prx I폐선암단련항체.피A549세포내섭적단련항체개도료세포적조망이급세포내Prx I단백표체수평적하강.결론:종서균체항체고중사선획득구유교고특이성적항Prx I폐선암단련항체.단련항체여폐선암세포유특이성친화력,병능유효억제기증식.