中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2013年
1期
24-28
,共5页
刘馨%王辉辉%何秋玲%马雁冰
劉馨%王輝輝%何鞦玲%馬雁冰
류형%왕휘휘%하추령%마안빙
肝炎,自身免疫性%表位,B淋巴细胞%细胞色素P450 CYP2D6
肝炎,自身免疫性%錶位,B淋巴細胞%細胞色素P450 CYP2D6
간염,자신면역성%표위,B림파세포%세포색소P450 CYP2D6
Hepatitis,autoimmune%Epitopes,B-lymphocyte%Cytochrome P-450 CYP2D6
目的 研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D6主要抗原表位aa262-270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应.方法 设计人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262-270 (WDPAQPPRD)的下负链寡核苷酸片段,经退火后插入表达乙肝核心蛋白 HBcAg的质粒pNP中(pNP质粒由pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成).构建成质粒pNP-AIH2;转染大肠杆菌DH5α感受态细胞；以IPTG诱导重组蛋白表达,经硫酸铵沉淀、洗涤,密度梯度离心纯化和脱盐后,肌肉注射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平,通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应.结果 SDS-PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD,与预期相符;电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在;ELISA显示,免疫小鼠血.清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应,检测到持续存在的特异抗体,滴度至少为1∶2000; western blot检测表明,抗血清在分子量约为55 kD的地方产生了一个特异的条带,与小鼠CYP2D6蛋白大小一致.与正常对照相比,实验组小鼠转氨酶水平未明显升高,肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征.结论 携带人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后,可刺激产生较强的特异抗体水平,但在观测时间内,未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应.
目的 研究在大腸桿菌中以重組病毒樣顆粒形式錶達的人Ⅱ型自身免疫性肝炎標誌蛋白 CYP2D6主要抗原錶位aa262-270免疫小鼠後對構建小鼠自身免疫性肝炎模型的效應.方法 設計人Ⅱ型自身免疫性肝炎標誌蛋白主要抗原錶位aa262-270 (WDPAQPPRD)的下負鏈寡覈苷痠片段,經退火後插入錶達乙肝覈心蛋白 HBcAg的質粒pNP中(pNP質粒由pThioHisA質粒插入HBcAg基因片段構建而成).構建成質粒pNP-AIH2;轉染大腸桿菌DH5α感受態細胞；以IPTG誘導重組蛋白錶達,經硫痠銨沉澱、洗滌,密度梯度離心純化和脫鹽後,肌肉註射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot檢測免疫後小鼠特異性抗體的產生和水平,通過轉氨酶檢測和肝髒石蠟切片HE染色觀察炎癥反應.結果 SDS-PAGE結果顯示重組菌誘導錶達的目的蛋白分子量為19kD,與預期相符;電鏡證實其以可溶性的病毒樣顆粒形式存在;ELISA顯示,免疫小鼠血.清與包被的肝髒勻漿蛋白特異反應,檢測到持續存在的特異抗體,滴度至少為1∶2000; western blot檢測錶明,抗血清在分子量約為55 kD的地方產生瞭一箇特異的條帶,與小鼠CYP2D6蛋白大小一緻.與正常對照相比,實驗組小鼠轉氨酶水平未明顯升高,肝切片HE染色沒有觀測到明顯的病理特徵.結論 攜帶人Ⅱ型自身免疫性肝炎標誌蛋白 CYP2D26主要錶位的病毒樣顆粒免疫小鼠後,可刺激產生較彊的特異抗體水平,但在觀測時間內,未見誘導小鼠產生明顯的肝髒炎癥反應.
목적 연구재대장간균중이중조병독양과립형식표체적인Ⅱ형자신면역성간염표지단백 CYP2D6주요항원표위aa262-270면역소서후대구건소서자신면역성간염모형적효응.방법 설계인Ⅱ형자신면역성간염표지단백주요항원표위aa262-270 (WDPAQPPRD)적하부련과핵감산편단,경퇴화후삽입표체을간핵심단백 HBcAg적질립pNP중(pNP질립유pThioHisA질립삽입HBcAg기인편단구건이성).구건성질립pNP-AIH2;전염대장간균DH5α감수태세포；이IPTG유도중조단백표체,경류산안침정、세조,밀도제도리심순화화탈염후,기육주사면역소서3차,이ELISA화western blot검측면역후소서특이성항체적산생화수평,통과전안매검측화간장석사절편HE염색관찰염증반응.결과 SDS-PAGE결과현시중조균유도표체적목적단백분자량위19kD,여예기상부;전경증실기이가용성적병독양과립형식존재;ELISA현시,면역소서혈.청여포피적간장균장단백특이반응,검측도지속존재적특이항체,적도지소위1∶2000; western blot검측표명,항혈청재분자량약위55 kD적지방산생료일개특이적조대,여소서CYP2D6단백대소일치.여정상대조상비,실험조소서전안매수평미명현승고,간절편HE염색몰유관측도명현적병리특정.결론 휴대인Ⅱ형자신면역성간염표지단백 CYP2D26주요표위적병독양과립면역소서후,가자격산생교강적특이항체수평,단재관측시간내,미견유도소서산생명현적간장염증반응.
