实验动物科学
實驗動物科學
실험동물과학
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
2013年
1期
6-10
,共5页
王洪军%马啸%赵明%杜小燕%李益琛%陈振文
王洪軍%馬嘯%趙明%杜小燕%李益琛%陳振文
왕홍군%마소%조명%두소연%리익침%진진문
比格犬%慢病毒载体%生殖细胞
比格犬%慢病毒載體%生殖細胞
비격견%만병독재체%생식세포
目的 观察慢病毒载体(Lentiviral vector,LV)对犬生殖细胞的转染,为基于LV的精子介导法制备转基因动物提供依据.方法 采用睾丸打点注射法,向比格犬两侧睾丸分别注入滴度为5×108、1×108、2×107 TU/mL的慢病毒液组成3个剂量组,每点注射量为每只犬0.2 mL.于注射后第2周开始采集精液,通过精液DNA的PCR检测和精子荧光镜检评估绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的整合及表达.结果 1)在高剂量组,整合并表达GFP基因的精子于第4周首现并持续至第17周；在中、低剂量组于第5周首现,分别持续到第14周、12周.2)GFP表达的高峰期在注射后第7周～10周.3)GFP表达于整个精子,以顶体后区和精子尾颈部表达最强.4)注射后第2周～6周,中剂量组犬采精困难,高低剂量组犬精子畸形率有上升的趋势.5)在GFP表达的高峰期,绿色荧光精子的百分率在高、中、低剂量组分别为43.33％、35.53％和4.55％,具有明显的差异.结论 基于LV的精子介导转基因法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)可成功获得转基因犬精子,转基因阳性率、表达的强度与持续时间与慢病毒滴度相关.
目的 觀察慢病毒載體(Lentiviral vector,LV)對犬生殖細胞的轉染,為基于LV的精子介導法製備轉基因動物提供依據.方法 採用睪汍打點註射法,嚮比格犬兩側睪汍分彆註入滴度為5×108、1×108、2×107 TU/mL的慢病毒液組成3箇劑量組,每點註射量為每隻犬0.2 mL.于註射後第2週開始採集精液,通過精液DNA的PCR檢測和精子熒光鏡檢評估綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的整閤及錶達.結果 1)在高劑量組,整閤併錶達GFP基因的精子于第4週首現併持續至第17週；在中、低劑量組于第5週首現,分彆持續到第14週、12週.2)GFP錶達的高峰期在註射後第7週～10週.3)GFP錶達于整箇精子,以頂體後區和精子尾頸部錶達最彊.4)註射後第2週～6週,中劑量組犬採精睏難,高低劑量組犬精子畸形率有上升的趨勢.5)在GFP錶達的高峰期,綠色熒光精子的百分率在高、中、低劑量組分彆為43.33％、35.53％和4.55％,具有明顯的差異.結論 基于LV的精子介導轉基因法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)可成功穫得轉基因犬精子,轉基因暘性率、錶達的彊度與持續時間與慢病毒滴度相關.
목적 관찰만병독재체(Lentiviral vector,LV)대견생식세포적전염,위기우LV적정자개도법제비전기인동물제공의거.방법 채용고환타점주사법,향비격견량측고환분별주입적도위5×108、1×108、2×107 TU/mL적만병독액조성3개제량조,매점주사량위매지견0.2 mL.우주사후제2주개시채집정액,통과정액DNA적PCR검측화정자형광경검평고록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)기인적정합급표체.결과 1)재고제량조,정합병표체GFP기인적정자우제4주수현병지속지제17주；재중、저제량조우제5주수현,분별지속도제14주、12주.2)GFP표체적고봉기재주사후제7주～10주.3)GFP표체우정개정자,이정체후구화정자미경부표체최강.4)주사후제2주～6주,중제량조견채정곤난,고저제량조견정자기형솔유상승적추세.5)재GFP표체적고봉기,록색형광정자적백분솔재고、중、저제량조분별위43.33％、35.53％화4.55％,구유명현적차이.결론 기우LV적정자개도전기인법(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)가성공획득전기인견정자,전기인양성솔、표체적강도여지속시간여만병독적도상관.
